产品说明：
Bioquest的MycoLight™快速荧光革兰氏阳性细菌染色试剂盒为测定活细菌中的革兰氏体征提供了一种新颖的一步荧光检测方法。革兰染色是临床和研究环境中细菌分类学分类的一种重要且广泛使用的方法。原始方法涉及相当多的步骤，如热固定，两步染色方案，酒精提取和复染。这些步骤可能会导致染色不一致。亚洲空运中心Bioquest的一步式套件通过消除劳动密集型步骤来克服现有问题。该试剂盒使用荧光标记的刀豆球蛋白A（ConA），这是一种凝集素，选择性地与暴露在革兰氏阳性细菌表面的N-乙酰氨基葡萄糖结合。当革兰氏阴性和革兰氏阳性细菌用荧光标记的ConA偶联物染色时，只有革兰氏阳性细菌发出红色荧光。染色的细菌可以通过荧光计监测。我们的试剂盒坚固方便，因为我们试剂盒中使用的荧光标记ConA偶联物比其他现有染料具有更高的亮度和光稳定性。
平台
荧光显微镜
Excitation：650 纳米
Emission：669 纳米
推荐板：黑色墙壁/透明底部
仪器规格：Cy5过滤器
组件
组件A：IF647-ConA：2瓶
组分B：检测缓冲液：1瓶（25 mL）

1. 制备细菌样品
2. 准备并添加IF647-ConA储备溶液
3. 用IF647-ConA在室温下在黑暗中孵育细菌样品5-15分钟
4. 取出IF647-ConA染色溶液并重悬于检测缓冲液中
5. 使用带有Cy5滤光片组的荧光显微镜分析样品

重要事项：使用前在室温下解冻所有试剂盒组件。。
储备溶液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
IF647-ConA 储备液 （100X）
将 50 μL 检测缓冲液（组分 B）加入一瓶 IF647-ConA（组分 A）中并充分混合。
注意将储备溶液储存在-20°C，避免光照并以较小的等分试样储存，以避免重复冻融循环。
实验方案样本
细菌样品的制备

1. 在适当的培养基中将细菌培养到对数后期。制备浓度在 10 范围内的细菌样品⁶到 10⁸细胞/毫升。

注意测量波长= 600nm（OD 600）的细菌培养物的光密度以确定细胞数。对于大肠杆菌培养，OD 600 = 1.0 等于 8 x 108细胞/毫升。

2. 通过以10，000×g离心5分钟除去培养基，并将沉淀重新悬浮在测定缓冲液（组分B）中。

染色方案

1. 将 1 μL IF647-ConA 储备溶液 （100X） 加入到 100 μL 细菌样品中。
2. 充分混合并在室温下在黑暗中孵育 5-15 分钟。
3. 以 10，000 x g 离心 5 分钟，然后取出 IF647-ConA 染色溶液。
4. 重悬于 100 μL 测定缓冲液（组分 B）中。
5. 用荧光显微镜通过Cy5（Ex / Em = 650 / 669 nm）通道监测细菌的荧光。

注意 该协议仅提供指南，应根据不同的细菌菌株或其他特定需求进行优化。如果观察到更高的背景，则可以在成像前添加带有测定缓冲液（组分B）的可选洗涤步骤。