产品说明：
激发（纳米）：658
发射（纳米）：691
线粒体是在大多数真核细胞中发现的膜封闭细胞器。线粒体产生ATP的大部分细胞供应。除了提供细胞能量外，线粒体还参与一系列其他过程，例如信号传导，细胞分化，细胞死亡以及细胞周期和细胞生长的控制。线粒体与几种人类疾病有关，包括线粒体疾病和心功能不全，并可能在衰老过程中发挥作用。我们的细胞导航®器荧光成像试剂盒是一套荧光成像工具，用于标记亚细胞器，如膜、溶酶体、线粒体、细胞核等。活细胞区室的选择性标记为在空间和时间背景下研究细胞事件提供了一种强大的方法。该特定试剂盒旨在用近红外（NIR）荧光标记活细胞中的线粒体。该试剂盒使用我们专有的染料，可能通过线粒体膜电位梯度选择性地积累在线粒体中。试剂盒中使用的NIR荧光线粒体染色剂是低背景和高信噪比至关重要的活细胞和组织成像的理想选择。线粒体指示剂是一种疏水性化合物，很容易渗透到完整的活细胞中，并在进入细胞后被困在线粒体中。这种荧光线粒体指示剂在线粒体中保留很长时间，因为它携带细胞保留基团。这一关键特性显著提高了染色效率。该试剂盒可轻松适用于许多不同类型的荧光平台，例如微孔板测定、免疫细胞化学和流式细胞术。它可用于各种研究，包括细胞粘附、趋化性、多药耐药性、细胞活力、细胞凋亡和细胞毒性。该试剂盒提供所有必需的成分，可用于增殖和非增殖细胞。
组件
组件 A：MitoLite™ NIR   1 瓶（100 μL，500X DMSO 储备溶液）
组分B：活细胞染色缓冲液 1 瓶 （50 mL）

1. 准备细胞
2. 添加Mitolite™近红外工作溶液
3. 在 37°C 下孵育 30 分钟至 2 小时
4. 在Ex / Em = 660 / 693nm的荧光显微镜下分析细胞（Cy5滤光片组）

重要说明：在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
工作溶液的制备
将 20 μL 500X Mitolite近红外（组分 A）加入 10 mL 活细胞染色缓冲液（组分 B）中，制成Mitolite™™近红外工作溶液。避光。注意：20 μL 500X Mitolite™ NIR（组分 A）足以用于一个 96 孔板。荧光线粒体指示剂的最佳浓度因具体应用而异。染色条件可以根据特定的细胞类型和细胞或组织对探针的渗透性进行修改。
实验方案样本
对于贴壁细胞：

1. 在 96 孔黑色壁/透明底板（100 μL/孔/96 孔板）或填充有适当培养基的培养皿内的盖玻片上培养细胞。
2. 当细胞达到所需的汇合时，加入等体积的Mitolite™近红外工作溶液。
3. 将细胞在 37°C、5% CO 中孵育2培养箱30分钟至2小时。
4. 用Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如，浓度为1：1的生长培养基的缓冲液）替换Mitolite™ NIR工作溶液。
5. 使用带有Cy5滤光片组的荧光显微镜观察细胞（Ex / Em = 660 / 693 nm）。注意：建议增加标记浓度或孵育时间，以便在细胞似乎没有充分染色的情况下让染料积聚。

对于悬浮细胞：

1. 以1000rpm离心细胞5分钟以获得细胞沉淀并吸出上清液。
2. 将细胞沉淀轻轻重悬于预热（37°C）生长培养基中，并加入等体积的Mitolite™ NIR工作溶液。
3. 将细胞在 37°C、5% CO 中孵育2培养箱30分钟至2小时。
4. 用Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HH缓冲液）或您选择的缓冲液（例如，浓度为1：1的生长培养基的缓冲液）替换Mitolite™ NIR工作溶液。
5. 使用带有Cy5滤光片组的荧光显微镜观察细胞（Ex / Em = 660 / 693 nm）。注意：建议增加标记浓度或孵育时间，以便在细胞似乎没有充分染色的情况下让染料积聚。悬浮细胞可以附着在用BD Cell-Tak®（BD生物科学）处理并染色为贴壁细胞的盖玻片上。