产品说明：
我们的细胞计™检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位的损失来监测细胞凋亡。线粒体膜电位的崩溃与线粒体通透性过渡孔的打开相吻合，导致 xi胞se素C释放到细胞质中，进而触发凋亡级联中的其他下游事件。我们的细胞计™ NIR膜电位检测试剂盒为所有基本组件提供了优化的测定方法，用于检测线粒体膜电位丧失的细胞凋亡。该荧光测定基于我们专有的阳离子MitoLite NIR™染料对细胞中线粒体膜电位的检测。在正常细胞中，MitoLite NIR主要在线粒体中积累，然而，在凋亡细胞中，MitoLite NIR™™染色强度降低。用MitoLite NIR™染色的细胞可以通过具有红色激发和远红发射（FL4通道）的流式细胞术进行可视化。该试剂盒可与其他试剂配对，例如蓝激发碘化丙啶和细胞计™磷脂酰丝an酸凋亡检测试剂盒（#22803），用于细胞活力和凋亡的多参数研究。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞术筛选细胞凋亡激活剂和抑制剂。
组件
组件 A：DMSO 中的 200X MitoLite™ NIR   1 瓶 （500 μL）
组分B：检测缓冲液    1 瓶 （100 mL）

1. 用密度为 5 × 10 的测试化合物制备细胞⁵至 1 × 10⁶细胞/毫升
2. 将 5 μL 200X MitoLite™ NIR 加入 1 mL 细胞溶液中
3. 将细胞在37°C，5%CO中孵育2培养箱15-30分钟
4. 沉淀细胞，并将细胞重悬于1 mL生长培养基中
5. 使用具有FL4通道的流式细胞仪分析细胞

重要说明：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒成分。
实验方案样本

1. 对于每个样品，在您选择的 1 mL 温热培养基或缓冲液中制备细胞，密度为 5×10⁵至 1×10⁶细胞/毫升。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。
2. 用测试化合物处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。

对于阴性对照：仅用载体处理细胞。
对于阳性对照：用FCCP或CCCP在5 oC，50%CO中以37-5μM处理细胞2培养箱15至30分钟。注意：CCCP或FCCP可以与MitoLite™ NIR同时添加。为了获得最佳结果，可能需要对每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。

3. 向处理过的细胞中加入 5 μL 200X MitoLite™ NIR（组分 A）。
4. 将细胞在37°C，5%CO 2培养箱中孵育15至30分钟。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用MitoLite™ NIR染料负载溶液孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。
5. 以 1000 rpm 离心细胞 4 分钟，然后将细胞重新悬浮在 1 mL 检测缓冲液（组分 B）或您选择的缓冲液中。
6. 使用具有FL4通道的流式细胞仪（Ex / Em = 635 / 660 nm）监测荧光强度。对感兴趣的细胞进行门控，不包括碎片。