产品说明：
该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位（MMP）的损失来检测细胞凋亡。线粒体膜电位的崩溃与线粒体通透性过渡孔的打开相吻合，导致 xi胞se素C释放到细胞质中，进而触发凋亡级联中的其他下游事件。我们的细胞计™橙色线粒体膜电位检测试剂盒通过优化的检测方法提供所有必需的成分。该荧光测定使用我们专有的阳离子MitoLite™橙来检测线粒体膜电位丧失的细胞凋亡。在正常细胞中，当线粒体中积累MitoLite™橙色时，红色荧光强度增加。然而，在凋亡细胞中，MitoLite™橙的荧光强度在MMP崩溃后降低。用MitoLite™橙色染色的细胞可以用流式细胞仪在488nm激发下以红色发射（FL2通道）观察。该试剂盒可与其他试剂一起使用，例如细胞计™磷脂酰丝an酸凋亡检测试剂盒（22835），用于细胞活力和细胞凋亡的多参数研究。该试剂盒针对使用流式细胞仪筛选细胞凋亡激活剂和抑制剂进行了优化。
组件
组件 A：DMSO 中的 500X MitoTell Orange ™ 1 瓶 （200 μL）
组分B：检测缓冲液 1 瓶 （100 mL）
实验方案样本
对于阳性对照：用FCCP或CCCP在5 oC，50%CO中以37-5μM处理细胞2培养箱15至30分钟。注意：CCCP或FCCP可以与MitoTell™ Orange同时添加。为了获得最佳结果，可能需要对每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。
该特定试剂盒旨在通过测量线粒体膜电位（MMP）的损失来检测细胞凋亡。线粒体膜电位的崩溃与线粒体通透性过渡孔的打开相吻合，导致 xi胞se素C释放到细胞质中，进而触发凋亡级联中的其他下游事件。我们的细胞计™橙色线粒体膜电位检测试剂盒通过优化的检测方法提供所有必需的成分。该荧光测定使用我们专有的阳离子MitoLite™橙来检测线粒体膜电位丧失的细胞凋亡。在正常细胞中，当线粒体中积累MitoLite™橙色时，红色荧光强度增加。然而，在凋亡细胞中，MitoLite™橙的荧光强度在MMP崩溃后降低。用MitoLite™橙色染色的细胞可以用流式细胞仪在488nm激发下以红色发射（FL2通道）观察。该试剂盒可与其他试剂一起使用，例如细胞计™磷脂酰丝an酸凋亡检测试剂盒（22835），用于细胞活力和细胞凋亡的多参数研究。该试剂盒针对使用流式细胞仪筛选细胞凋亡激活剂和抑制剂进行了优化。
组件
组件 A：DMSO 中的 500X MitoTell Orange ™ 1 瓶 （200 μL）
组分B：检测缓冲液 1 瓶 （100 mL）
- 用密度为 5 × 10 的测试化合物制备细胞5至 1 × 106细胞/毫升
- 将 2 μL 的 500X MitoTell™ 橙子加入 1 mL 细胞溶液中
- 将细胞在37°C，5%CO中孵育2培养箱 15 - 30 分钟
- 沉淀细胞，并将细胞重悬于1 mL生长培养基中
- 使用具有FL2通道的流式细胞仪分析细胞
实验方案样本
- 对于每个样品，在您选择的 1 mL 温热培养基或缓冲液中制备细胞，密度为 5×105至 1×106细胞/毫升。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。
- 用测试化合物处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡，并建立平行对照实验。
对于阳性对照：用FCCP或CCCP在5 oC，50%CO中以37-5μM处理细胞2培养箱15至30分钟。注意：CCCP或FCCP可以与MitoTell™ Orange同时添加。为了获得最佳结果，可能需要对每个单独的细胞系滴定CCCP或FCCP。
- 向处理过的细胞中加入 2 μL 500X MitoTell™ 橙（组分 A）。
- 将细胞在37°C，5%CO中孵育2培养箱15至30分钟。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用MitoTell™橙染料负载溶液孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。
- 以 1000 rpm 离心细胞 4 分钟，然后将细胞重新悬浮在 1 mL 检测缓冲液（组分 B）或您选择的缓冲液中。
- 使用具有FL2通道的流式细胞仪（Ex / Em = 540 / 590 nm）监测荧光强度。对感兴趣的细胞进行门控，不包括碎片。