产品说明：
我们的细胞计™检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量活细胞中的通用半胱天冬酶3/7活化来监测细胞凋亡。半胱天冬酶3/7活化被广泛接受为细胞凋亡的可靠指标。半胱天冬酶对肽序列Asp-Glu-Val-Asp（DEVD）具有底物选择性。该试剂盒使用TF2-DEVD-FMK作为半胱天冬酶3/7活性的荧光指示剂。TF2-DEVD-FMK是细胞渗透性，无毒，并且不可逆地与凋亡细胞中的活化干酪酶3/7结合。一旦与半胱天冬酶结合，红色荧光试剂就保留在细胞内。结合事件阻止半胱天冬酶进一步催化，但不会阻止细胞凋亡的进行。试剂将在加入培养基后15分钟内开始与活性半胱天冬酶反应。该试剂盒通过优化的检测方案提供所有基本组件。它用于定量凋亡细胞中大多数活化的半胱天冬酶活性，或用于筛选半胱天冬酶抑制剂。绿色标签允许通过流式细胞术直接检测凋亡细胞中活化的半胱天冬酶。
组件
组件 A：500X TF2-开发-FMK—1 瓶 （100 μL）
组分B：检测缓冲液—1 瓶 （50 mL）
组分C：500X碘化丙啶—1 瓶 （100 μL）

1. 用密度为 5 × 10 的测试化合物制备细胞⁵至1×10⁶细胞/毫升
2. 将 1 μL 500X TF2-DEVD-FMK 加入 0.5 mL 细胞溶液中
3. 在 37°C、5% CO 下孵育2培养箱 1 - 4 小时
4. 沉淀细胞并将细胞重悬于0.5 mL测定缓冲液或生长培养基中
5. 使用带 530/30 nm 滤光片的流式细胞仪（FITC通道）分析细胞

重要说明：在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
实验方案样本

1. 对于每个样品，在您选择的 0.5 mL 温热培养基或缓冲液中制备细胞，密度为 5×10⁵至 1×10⁶细胞/毫升。注意：应单独评估每个细胞系，以确定诱导细胞凋亡的最佳细胞密度。
2. 用测试化合物处理细胞一段时间以诱导细胞凋亡，并产生阳性和阴性对照。
3. 向处理过的细胞中加入 1 μL 500X TF2-DEVD-FMK（组分 A）。
4. 将细胞在 37°C、5% CO 中孵育₂培养箱1-4小时。注意：对于贴壁细胞，用0.5mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用TF2-DEVD-FMK孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
5. 洗涤并旋转细胞两次。将细胞重悬于0.5 mL测定缓冲液或生长培养基中。注意：TF2-DEVD-FMK是荧光的;首先，洗掉任何未结合的试剂以去除背景非常重要。
6. 如果需要，用DNA染色剂标记细胞（例如碘化丙啶或死细胞的7-AAD）。
7. 如果需要，请固定单元格。
8. 使用带有530/30nm滤光片（FITC通道）的流式细胞仪监测荧光强度。对感兴趣的细胞进行门控，不包括碎片。