产品说明：
我们的细胞计™检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝an酸（PS）的易位来监测细胞凋亡。在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外小叶上。磷脂酰丝an酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的通用指标，可以在观察到形态变化之前检测到。该试剂盒使用特异性结合PS的荧光膜联蛋白V.膜联蛋白V偶联物已被证明可以选择性结合PS。这种特殊的检测试剂盒经过优化，可使用带有太平洋蓝色滤光片组的流式细胞仪监测细胞凋亡。
组件
组分 A：Annexin V-iFluor™ 450（100X 储备溶液）—1 瓶（200 μL/瓶）
组分B：测定缓冲液（4°C）—1 瓶 （50 mL）
组分C：100X碘化丙啶—1 瓶 （100 μL）
协议摘要

1. 用测试化合物制备细胞（200 μL/样品）
2. 加入膜联蛋白V-mFluor Violet™ 450测定溶液
3. 在室温下孵育 30 - 60 分钟
4. 使用带 450/40 nm 滤光片（太平洋蓝色通道）的流式细胞仪或带 DAPI 滤光片组的荧光显微镜分析细胞

重要说明：在开始实验之前，在室温下解冻100X碘化丙啶（组分C）。
实验方案样本
用膜联蛋白V-mFluor Violet™ 450制备和孵育细胞：

1. 用测试化合物处理细胞所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为4-6小时）以诱导细胞凋亡。
2. 离心细胞得到 1 - 5×10⁵细胞/管。
3. 将细胞重悬于 200 μL 检测缓冲液（组分 B）中。
4. 向细胞中加入 2 μL 膜联蛋白 V-mFluor 紫™ 450（组分 A）。
5. 自选：将 2 μL 100X 碘化丙啶（组分 C）加入坏死细胞细胞中。
6. 在室温下孵育 30 至 60 分钟，避光。
7. 在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入 300 μL 测定缓冲液（组分 B）以增加体积。
8. 使用带有太平洋蓝通道的流式细胞仪或带有DAPI滤光片组的荧光显微镜监测荧光强度。

使用流式细胞仪进行分析：

1. 使用具有太平洋蓝通道的流式细胞仪定量膜联蛋白V-mFluor Violet™ 450结合。当将碘化丙啶添加到细胞中时，使用 610/20 nm 滤光片（PE-德克萨斯州红色通道）测量细胞活力。注意：膜联蛋白V结合流式细胞术分析不常规测试，因为在细胞分离或收获过程中可能发生特定的膜损伤。然而，利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法先前已由Casiola-Rosen等人和van Engelend等人报道。

使用荧光显微镜进行分析：

1. 孵育后移液细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。
2. 将细胞添加到用玻璃盖玻片覆盖的载玻片上。注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片上培养细胞。用V-mFluor Violet™ 450孵育后，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后将测定缓冲液加回盖玻片中。在载玻片上倒置盖玻片并可视化细胞。用V-mFluor Violet™ 2孵育后，细胞也可以固定在450%甲醛中，并在显微镜下观察。
3. 使用DAPI滤光片组在荧光显微镜下用V-mFluor Violet™ 450分析凋亡细胞。当将碘化丙啶添加到细胞中时，使用TRITC通道测量细胞活力。质膜上的蓝色染色表明V-mFluor Violet™ 450与细胞表面的PS结合。

 
AAT Bioquest  22829  细胞计™膜联蛋白 V 结合细胞凋亡检测试剂盒 *在 405 nm 处激发的绿色荧光*  100 Tests，产品说明：
我们的细胞计™检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的工具。有多种参数可用于监测细胞活力。该特定试剂盒旨在通过测量磷脂酰丝an酸（PS）的易位来监测细胞凋亡。在细胞凋亡中，PS被转移到质膜的外小叶上。磷脂酰丝an酸在细胞表面的出现是细胞凋亡初始/中间阶段的通用指标，可以在观察到形态变化之前检测到。该试剂盒使用特异性结合PS的荧光膜联蛋白V.膜联蛋白V偶联物已被证明可以选择性结合PS。这种特殊的检测试剂盒经过优化，可使用带有太平洋蓝色滤光片组的流式细胞仪监测细胞凋亡。
组件
组分 A：Annexin V-iFluor™ 450（100X 储备溶液） 1 瓶（200 μL/瓶）
组分B：测定缓冲液（4°C）    1 瓶 （50 mL）
组分C：100X碘化丙啶     1 瓶 （100 μL）

1. 用测试化合物制备细胞（200 μL/样品）
2. 加入膜联蛋白V-mFluor Violet™ 450测定溶液
3. 在室温下孵育 30 - 60 分钟
4. 使用带 450/40 nm 滤光片（太平洋蓝色通道）的流式细胞仪或带 DAPI 滤光片组的荧光显微镜分析细胞

重要说明：在开始实验之前，在室温下解冻100X碘化丙啶（组分C）。
实验方案样本
用膜联蛋白V-mFluor Violet™ 450制备和孵育细胞：

1. 用测试化合物处理细胞所需的时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为4-6小时）以诱导细胞凋亡。
2. 离心细胞得到 1 - 5×10⁵细胞/管。
3. 将细胞重悬于 200 μL 检测缓冲液（组分 B）中。
4. 向细胞中加入 2 μL 膜联蛋白 V-mFluor 紫™ 450（组分 A）。
5. 自选：将 2 μL 100X 碘化丙啶（组分 C）加入坏死细胞细胞中。
6. 在室温下孵育 30 至 60 分钟，避光。
7. 在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入 300 μL 测定缓冲液（组分 B）以增加体积。
8. 使用带有太平洋蓝通道的流式细胞仪或带有DAPI滤光片组的荧光显微镜监测荧光强度。

使用流式细胞仪进行分析：

1. 使用具有太平洋蓝通道的流式细胞仪定量膜联蛋白V-mFluor Violet™ 450结合。当将碘化丙啶添加到细胞中时，使用 610/20 nm 滤光片（PE-德克萨斯州红色通道）测量细胞活力。注意：膜联蛋白V结合流式细胞术分析不常规测试，因为在细胞分离或收获过程中可能发生特定的膜损伤。然而，利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法先前已由Casiola-Rosen等人和van Engelend等人报道。
2. 使用荧光显微镜进行分析：
3. 孵育后移液细胞悬液，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后用测定缓冲液重悬细胞。
4. 将细胞添加到用玻璃盖玻片覆盖的载玻片上。注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片上培养细胞。用V-mFluor Violet™ 450孵育后，用测定缓冲液冲洗1-2次，然后将测定缓冲液加回盖玻片中。在载玻片上倒置盖玻片并可视化细胞。用V-mFluor Violet™ 2孵育后，细胞也可以固定在450%甲醛中，并在显微镜下观察。
5. 使用DAPI滤光片组在荧光显微镜下用V-mFluor Violet™ 450分析凋亡细胞。当将碘化丙啶添加到细胞中时，使用TRITC通道测量细胞活力。质膜上的蓝色染色表明V-mFluor Violet™ 450与细胞表面的PS结合。