产品说明：
我们的细胞计™检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的工具。可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在监测细胞凋亡、坏死和健康细胞。细胞凋亡被描述为一种活跃的、程序化的自主细胞分解过程，可避免引发炎症。在细胞凋亡中，磷脂酰丝an酸（PS）转移到质膜的外小叶。作为细胞凋亡初始/中间阶段的通用指标，可以在观察到形态变化之前检测到细胞表面磷脂酰丝an酸的外观。该试剂盒中使用的PS传感器在与膜PS结合时具有绿色荧光。 坏死已被表征为由环境扰动引起的被动，意外的细胞死亡，炎症细胞内容物不受控制地释放。质膜完整性的丧失，如膜不可渗透的7-AAD（Ex / Em = 546/647 nm）标记细胞核的能力所证明的那样，是证明晚期细胞凋亡和坏死的直接方法。此外，该试剂盒还提供用于标记活细胞质的活细胞质标记染料细胞钙黄绿素™紫450（Ex / Em = 405 / 450 nm）。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡（绿色）、坏死（绿色和/或红色）和健康细胞（蓝色）。
组件
组分 A：100X Apopxin™ Green 1 瓶 （200 μL）
组分B：检测缓冲液 1 瓶 （50 mL）
组件 C：200X 7-AAD 1 瓶 （100 μL）
组分D：细胞钙黄绿素™紫450 1瓶（冻干粉）
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.细胞钙黄绿素紫450储备溶液（200X）：
将100μLDMSO加入细胞钙黄绿素紫450（组分D）的小瓶中，制成200X细胞钙黄绿素紫450储备™溶液。™™避光。】
实验方案样本
用Apopxin™Green制备并孵育细胞：
我们的细胞计™检测试剂盒是一套用于监测细胞活力的工具。可以使用多种参数。该特定试剂盒旨在监测细胞凋亡、坏死和健康细胞。细胞凋亡被描述为一种活跃的、程序化的自主细胞分解过程，可避免引发炎症。在细胞凋亡中，磷脂酰丝an酸（PS）转移到质膜的外小叶。作为细胞凋亡初始/中间阶段的通用指标，可以在观察到形态变化之前检测到细胞表面磷脂酰丝an酸的外观。该试剂盒中使用的PS传感器在与膜PS结合时具有绿色荧光。 坏死已被表征为由环境扰动引起的被动，意外的细胞死亡，炎症细胞内容物不受控制地释放。质膜完整性的丧失，如膜不可渗透的7-AAD（Ex / Em = 546/647 nm）标记细胞核的能力所证明的那样，是证明晚期细胞凋亡和坏死的直接方法。此外，该试剂盒还提供用于标记活细胞质的活细胞质标记染料细胞钙黄绿素™紫450（Ex / Em = 405 / 450 nm）。该试剂盒经过优化，可通过流式细胞仪和荧光显微镜检测细胞凋亡（绿色）、坏死（绿色和/或红色）和健康细胞（蓝色）。
组件
组分 A：100X Apopxin™ Green 1 瓶 （200 μL）
组分B：检测缓冲液 1 瓶 （50 mL）
组件 C：200X 7-AAD 1 瓶 （100 μL）
组分D：细胞钙黄绿素™紫450 1瓶（冻干粉）
- 用测试化合物制备细胞（200 μL/样品）
- 添加阿普辛™绿色检测液
- 在室温下孵育 30 - 60 分钟
- 使用带发射滤光片的流式细胞仪分析细胞 530/30 nm（FITC通道 - 用于凋亡细胞），450/40 nm（太平洋蓝通道 - 用于健康细胞）和670/14 nm（PE-Cy5通道 - 用于坏死细胞）
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1.细胞钙黄绿素紫450储备溶液（200X）：
将100μLDMSO加入细胞钙黄绿素紫450（组分D）的小瓶中，制成200X细胞钙黄绿素紫450储备™溶液。™™避光。】
实验方案样本
用Apopxin™Green制备并孵育细胞：
- 用测试化合物处理细胞一段时间（用星形孢菌素处理的Jurkat细胞为4-6小时）以诱导细胞凋亡。
- 离心细胞得到1-5×105细胞/管。
- 将细胞重悬于 200 μL 检测缓冲液（组分 B）中。
- 向细胞中加入 2 μL 100X Apopxin ™绿（组分 A）。
- 可选 1：向坏死细胞中加入 1 μL 200X 7-AAD（组分 C）。
- 可选 2：然后将 1 μL 200X 细胞钙黄绿素™紫 450 储备溶液加入细胞中，用于健康细胞染色。
- 在室温下孵育 30 至 60 分钟，避光。
- 在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前，加入 300 μL 测定缓冲液（组分 B）以增加体积。
- 使用带有发射滤光片的流式细胞仪监测荧光强度 530/30 nm（FITC通道 - 用于凋亡细胞），450/40 nm（太平洋蓝通道 - 用于健康细胞）和670/14 nm（PE-Cy5通道 - 用于坏死细胞）。
- 使用带有发射滤光片的流式细胞仪定量Apopxin™ Green结合530 / 30 nm（FITC通道 - 用于凋亡细胞），450 / 40 nm（Pacific Blue 通道 - 用于健康细胞）和670 / 14 nm（PE-Cy5通道 - 用于坏死细胞）。注意：Apopxin™与贴壁细胞结合的流式细胞术分析未经常规测试，因为在细胞分离或收获过程中可能发生特定的膜损伤。然而，利用膜联蛋白V对贴壁细胞类型进行流式细胞术的方法先前已由Casiola-Rosen等人和van Engelend等人报道。
- 孵育后移液细胞悬液，用检测缓冲液冲洗1-2次，然后用检测缓冲液重悬细胞。
- 将细胞添加到覆盖有玻璃盖玻片或黑色壁/透明底部96孔微孔板的载玻片上。注意：对于贴壁细胞，建议直接在盖玻片（或黑壁/透明底部96孔微孔板）上培养细胞。用Apopxin™ Green孵育后，用检测缓冲液冲洗1-2次，然后将检测缓冲液加回盖玻片（或黑色壁/透明底部96孔微孔板）。在载玻片上倒置盖玻片并可视化细胞。细胞也可以在与Apopxin™ Green孵育后固定在2%甲醛中，并在显微镜下观察。
- 使用FITC滤光片在荧光显微镜下用Apopxin™ Green分析凋亡细胞。当添加7-AAD时，使用德克萨斯红过滤器测量细胞活力，当将细胞钙黄绿素™紫450添加到细胞中时，使用DAPI或紫色过滤器测量细胞活力。质膜上的绿色染色表明Apopxin™ Green与细胞表面的PS结合。