产品说明：
活性氧（ROS）是氧正常代谢的天然副产物，在细胞信号传导中起重要作用。然而，在氧化应激相关状态下，ROS水平会急剧增加。ROS的积累导致细胞结构的严重损害。氧化应激在心血管疾病，糖尿病，骨质疏松症，中风，炎症性疾病，许多神经退行性疾病和癌症中的作用已经得到很好的确立。ROS测量将有助于确定氧化应激如何调节不同的细胞内途径。细胞计™荧光 ROS 检测试剂盒使用我们 du te 的 Amplite® ROS Green 传感器来量化活细胞中的 ROS。Amplite® ROS Green是细胞渗透性的。当它与ROS反应时，它会产生绿色荧光。细胞计™荧光 ROS 检测试剂盒提供灵敏的一步荧光检测，可在孵育一小时后检测活细胞中的细胞内 ROS。该试剂盒针对流式细胞术应用进行了优化，其信号可通过 Ex/Em = 490/520 nm（FL1 通道）进行检测。
组件
组件A：Amplite™ ROS 绿色—1瓶
组分B：检测缓冲液—1瓶 （10 mL）
组件C：DMSO—1瓶 （200 μL）

1. 制备密度为 0.5 - 1 × 10 的细胞⁶细胞/毫升
2. 将 1 μL 500X Amplite™ ROS 绿液加入 0.5 mL 细胞悬液中
3. 将细胞在37ºC下染色1小时
4. 处理细胞以诱导ROS
5. 使用具有FL1通道的流式细胞仪分析细胞（Ex / Em = 490 / 520 nm）

重要说明：在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

1. Amplite ROS 绿色储备溶液 （500X）：将 100 μL DMSO（组分 C）加入 Amplite ROS 绿色（组分 A）小瓶中，并充分混合制成 500X Amplite™ ROS 绿色储备溶液。

™™避光。注意：储存时，请密封管子。
实验方案样本

1. 对于每个样品，在 0.5 mL 检测缓冲液（组分 B）或您选择的缓冲液中制备细胞，密度为 5×105至 1×106细胞/毫升。注意：应单独评估每个细胞系，以确定用于ROS诱导的最佳细胞密度
2. 将 1 μL 500X Amplite™ ROS 绿色储备溶液加入 0.5 mL 细胞悬液中。
3. 在37ºC孵育1小时。注意：对于贴壁细胞，用0.5 mM EDTA轻轻提起细胞以保持细胞完整，并在用Amplite™ ROS Green孵育之前用含血清的培养基洗涤细胞一次。适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和测试化合物。优化每个实验的孵育时间。
4. 通过在所需缓冲液（例如 PBS 或 HBSS）中加入 50 μL 11X 测试化合物来处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的缓冲液。
5. 将细胞在37ºC孵育所需的时间以诱导ROS，避光。注意：我们用100μM TBHP（叔丁基过氧化*）在37ºC下处理Jurkat细胞30分钟以诱导ROS。有关详细信息，请参见图 1。
6. 使用具有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490 / 520 nm）监测荧光强度。对感兴趣的细胞进行门控，不包括碎片。