产品说明：
线粒体是细胞超氧化物的主要生产者。产生低至中等水平的超氧化物对于正确调节许多基本细胞过程至关重要，包括基因表达、信号转导和肌肉对耐力运动训练的适应。不受控制的线粒体超氧化物产生会引发细胞氧化损伤，从而导致多种疾病的发病机制，包括癌症、心血管疾病、神经退行性疾病和衰老。细胞内线粒体超氧化物的检测对于了解适当的细胞氧化还原调节及其失调对各种病理的影响至关重要。细胞计™荧光线粒体超氧化物活性测定试剂盒使用我们独特的超氧化物指示剂来量化活细胞中的超氧化物水平。MitoROS™ 580是活细胞通透性的，可以快速，选择性地靶向线粒体中的超氧化物。当它与超氧化物反应时会产生红色荧光。细胞计™荧光法细胞内超氧化物检测试剂盒提供灵敏的一步荧光测定，可在孵育一小时后检测活细胞中的线粒体超氧化物。该试剂盒可用于荧光酶标仪和荧光显微镜应用。
组件
组件 A：MitoROS™ 580—1瓶
组分B：检测缓冲液—1 瓶 （20 mL）
组件C：DMSO—1 瓶 （100 μL）

1. 在生长培养基中制备细胞
2. 用测试化合物处理细胞以诱导超氧化物
3. 添加 MitoROS™ 580 工作溶液
4. 将细胞在 37°C 下染色 30 - 60 分钟
5. 在Ex/Em= 540/590 nm（截止= 570 nm）或带有TRITC滤光片组的荧光显微镜下监测荧光增加（底部读数模式）

重要说明：在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。

1. MitoROS 580储备溶液（500X）：将50 μL DMSO（组分C）加入MitoROS 580（组分A）的小瓶中，充分混合制成500X MitoROS™™™ 580储备溶液。避光。注意：25 μL 500X MitoROS™ 580 储备溶液足以用于 1 个板。储存时，请密封管子。

工作溶液的制备
将 25 μL 500X MitoROS 580 储备溶液加入 10 mL 检测缓冲液（组分 B）中，充分混合制成 MitoROS™™ 580 工作溶液。注意：该MitoROS™ 580工作溶液在室温下可稳定保存至少2小时。
实验方案样本

1. 在所需的缓冲液（如PBS或HHBS）中用10 μL 10X测试化合物（96孔板）或5 μL 5X测试化合物（384孔板）处理细胞。对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的复合缓冲液。
2. 为了诱导超氧化物，将细胞板在37°C下孵育所需的时间，避光。注意：我们用50μM抗mei素A（AMA）在37°C下处理HeLa细胞30分钟以诱导超氧化物。有关详细信息，请参见图 1。
3. 向细胞板中加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 MitoROS™ 580 工作溶液。
4. 将细胞在 37°C 下孵育 30 至 60 分钟。
5. 使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 540 / 590 nm（截止= 570 m）下监测荧光增加，或使用带有TRITC滤光片的荧光显微镜观察细胞。