产品说明：
葡萄糖代谢是将葡萄糖转化为能量的过程，是大多数生物体能量供应的主要来源。2-NBDG [2-（N-（7-硝基苯-2-氧杂-1，3-二氮唑-4-基）氨基）-2-脱氧葡萄糖]是一种荧光标记的葡萄糖示踪剂，已被证明可有效监测细胞中的葡萄糖转运，因为2-NBDG通过与葡萄糖相同的葡萄糖转运蛋白（GLUT）转运到细胞中。一旦2-NBDG在细胞中被摄取，它就会在C-6位置经历磷酸化，产生2-NBDG-6-磷酸，该磷酸盐很好地保留在细胞内。与其他葡萄糖示踪剂（如2-DG或FDG）相比，2-NBDG允许在单细胞水平上以高时间和空间分辨率原位测量2-NBDG。亚洲空运中心Bioquest的细胞计™ 2-NBDG葡萄糖摄取检测试剂盒为测量培养细胞中的葡萄糖摄取提供灵敏的非放射性检测。在该试剂盒中，检测缓冲液I用于增强细胞中2-NBDG的摄取和保留，而检测缓冲液II可以改善细胞中2-NBDG的信噪比。荧光信号可以通过荧光显微镜或流式细胞仪使用488 nm激光和530/30 nm发射滤光片（FITC通道）进行监测。细胞计™ 2-NBDG 葡萄糖摄取测定试剂盒是监测葡萄糖转运蛋白的最可靠工具。
用测试化合物制备细胞
添加 2-NBDG 染色溶液
在 37^oC时孵育细胞20 分钟
去除 2-NBDG 染色液
用检测缓冲液I洗涤细胞
使用荧光显微镜或带 530/30 nm 滤光片的流式细胞仪（FITC通道）分析细胞
重要说明
在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
工作溶液的制备
将 5 μL 2-NBDG （10 mg/mL）（组分 A）加入 1.5 mL 检测缓冲液 I（组分 B）中，充分混合制成 2-NBDG 染色溶液。避光。注意：这种2-NBDG染色溶液在室温下可稳定保存1小时。由于最佳染色条件可能因不同的细胞类型而异，因此建议为每个特定实验确定组分A的最佳浓度。
实验方案样本

1. 将测试化合物添加到细胞中，并在 24°C、48% CO 中孵育所需的时间（例如 96、37 或 5 小时）2孵化器。对于空白孔（不含细胞的培养基），加入相同量的复合缓冲液。注意：应单独评估每个细胞系，以确定最佳细胞密度和孵育时间。我们将 CHO-K1 细胞与 20 mM 葡萄糖一起孵育用于葡萄糖竞争测定，将 100 μM 根皮素与 GLUTs 抑制测定孵育。有关详细信息，请参阅数据分析。
2. 在处理结束时，在实验之前以5 rpm的速度将板离心800分钟，制动器关闭。
3. 在不干扰细胞的情况下吸出上清液。
4. 加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 2-NBDG 染色溶液。注意：需要为每个细胞系和每个特定实验确定最佳孵育时间。我们将 CHO-K1 细胞在 37 岁时孵育oC 与 100 μM 2-NBDG （~34 μg/mL） 一起 20 分钟以显示足够的葡萄糖摄取。有关详细信息，请参阅数据分析。
5. 在孵育结束时，以5rpm离心板800分钟。
6. 在不干扰细胞的情况下去除2-NBDG染色溶液。
7. 对于荧光显微镜：用检测缓冲液I（组分B）洗涤细胞一次。将细胞保存在 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的测定缓冲液 II（组分 C）中。使用带有FITC滤光片的荧光显微镜监测荧光信号。
8. 对于流式细胞仪：如果需要，使用 EDTA 分离细胞，并将细胞重悬于 100 μL/样品的检测缓冲液 I（组分 B）中。使用带有530/30 nm滤光片（FITC通道）的流式细胞仪监测荧光信号。