产品说明：

激发（纳米） 493

发射（纳米） 515

量子产率 0.751

 
细胞计™流式细胞术钙检测试剂盒提供基于荧光的检测，用于使用流式细胞仪检测细胞内钙动员。它可用于动力学读数或终点读数。将Calbryte™ 520 AM染料加载到感兴趣的细胞中后，只需洗涤细胞并加入钙通量激动剂，然后可以使用动力学读取模式或终点读取模式通过流式细胞仪读取样品。Calbryte™ 520 AM可以通过扩散被动地穿过细胞膜。一旦进入细胞，Calbryte™ 520 AM的亲脂性封闭基团被酯酶裂解，导致带负电荷的荧光染料留在细胞内。与钙结合后，其荧光大大增强。当表达感兴趣的GPCR的细胞被激动剂刺激时，受体发出细胞内钙释放的信号，这显着增加了Calbryte™ 520的荧光。细胞计™流式细胞术钙检测试剂盒可用于监测细胞钙通量以及细胞分选。
 
组件
组件 A：Calbryte™ 520 AM  1 瓶，冻干
组分B：检测缓冲液     1 瓶 （50 mL）
组分C：丙磺舒（可选）    1 瓶 （10 mL， 25mM）
组分D：HHBS（(Hanks’ with 20 mM Hepes）  1 瓶 （100 mL）
 
示例协议
 
协议摘要
 

1. 在检测缓冲液中制备细胞
2. 加入 Calbryte™ 520 AM 染料上样溶液 （1 μL）
3. 在 37°C 下孵育 30 分钟
4. 清洗细胞
5. 添加钙通量刺激器
6. 使用530/30 nm滤光片（FITC通道）的流式细胞仪监测荧光强度

 
重要说明
在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
 
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
 
Calbryte 520 AM 储备溶液 （500X）：
将 100 μL DMSO（未提供）加入 Calbryte™™ 520 AM 储备溶液（组分 A）的小瓶中，并充分混合。注意：100 μL Calbryte™ 520 AM 储备溶液足以进行 100 次测定。如果管密封严密，未使用的Calbryte™ 520 AM储备溶液可以等分并在<-20°C下储存一个月以上。避光避光，避免反复冻融循环。
 
 
实验方案样本

1. 取出细胞培养基并加入 0.5 mL 检测缓冲液。注意：对于贴壁细胞和非贴壁细胞，4 X105– 8 X105和 1X106- 2X106分别建议使用。应单独评估每个细胞系，以确定细胞内钙动员的最佳细胞密度。
2. 将 1 μL Calbryte™ 520 AM 储备溶液 （500X） 添加到检测缓冲液（组分 B）中的 0.5 mL 非贴壁或贴壁细胞中。注意：如果您的细胞（例如CHO细胞）含有有机阴离子转运，则可以将丙磺舒（组分C）添加到染料工作溶液中（最终孔浓度为0.125-1 mM）以减少脱酯指示剂的泄漏。
3. 将细胞在 37°C 下孵育 30 分钟。
4. 对于非贴壁细胞，离心细胞并去除染料。将细胞重新悬浮在 0.4 mL HHBS（组分 D）中。对于贴壁细胞，使用0.5 mM EDTA轻轻地将细胞从板和离心机中取出。将细胞重新悬浮在 0.4 mL HHBS（组分 D）中。注意：为了从平板上分离贴壁细胞，可以考虑使用酶试剂（例如胰蛋白酶，Accutase），但需要进行测试以确保细胞表面的目标受体不受影响。
5. 用 HHBS 或您想要的缓冲液制备 5X 激动剂化合物。
6. 使用100/530nm滤光片（FITC通道）在流式细胞仪上加入30μL制备的激动剂之前和之后分析样品。注意：为了获得最佳结果，重要的是在加入激动剂后1分钟内运行测定。同样重要的是，要确保所有样品从添加激动剂到实际读数开始之间的时间保持不变。