产品说明：

校正系数 （260 nm） 1.076

校正系数 （280 nm） 0.769

消光系数（厘米-1M-1) 23430

激发（纳米） 495

发射（纳米） 516

量子产率 0.161

 
细胞计™无需洗涤和无丙磺舒终点钙检测试剂盒可实现基于荧光的均匀检测，无需使用动力学读取模式即可检测细胞内钙动员。它可用于具有底部读取模式的荧光酶标仪，该读数器没有内置液体分配器或动力学读取功能。将Fluo-8E™AM染料加载到感兴趣的细胞中后，无需洗涤步骤，只需通过液体分配器或手动移液器添加钙通量激动剂，然后通过荧光读数器读取板。Fluo-8E™ AM可以通过扩散被动地穿过细胞膜。一旦进入细胞，Fluo-8E™ AM的亲脂性封闭基团就会被酯酶切割，从而产生带负电荷的荧光染料留在细胞内。它的荧光大大增强，与钙结合后持久。当表达感兴趣的GPCR的细胞被激动剂刺激时，受体发出细胞内钙释放信号，这显着增加Fluo-8E™的荧光。Fluo-100E的高灵敏度、>8倍荧光增强和持久的荧光信号的特点使Fluo-96E™成为在荧光酶标仪上测量细胞钙的理想指标，这些酶标仪不具有流体转移和动力学读取模式功能。细胞计™无需洗涤和无丙磺舒终点钙测定试剂盒可以 384 孔或 <> 孔微量滴定板形式进行。
 
组件
组件 A：Fluo-8E™ AM               2 瓶，冻干
组件B：10X Pluronic® F127 Plus     1 瓶 （1 mL）
组分C：HHBS（Hanks’ with 20 mM Hepes）   1 瓶 （20 mL）
 
示例协议
 
协议摘要
 

1. 在生长培养基中制备细胞
2. 加入 Fluo-8E™ AM 染料上样溶液（100 孔板为 96 μL/孔，25 孔板为 384 μL/孔）
3. 在 37°C 下孵育 60 分钟
4. 加入 50 μL 钙通量刺激器
5. 监测Ex/Em = 490/525 nm处的荧光强度

 
重要说明
在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
 
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
 

1. Fluo-8E AM 储备溶液：

将 10 μL DMSO 加入 Fluo-8E™™ AM （组分 A）小瓶中并充分混合。注意：10 μL Fluo-8E™ AM 储备溶液足以进行 50 次测定（96 孔板的一半）。注意：未使用的Fluo-8E™ AM储备溶液可以等分并储存在< -20oC超过一个月，如果管子密封严密。避光避光，避免反复冻融循环。
 
2. 检测缓冲液 （1X）：
将 9 mL HHBS（组分 C）加入 10X Pluronic F127 Plus（1 mL，组分 B）中，并充分混合。注意：10 mL 检测缓冲液 （1X） 足以用于一块板。将未使用的1X测定缓冲液分装并储存在<-20°C。避光避光，避免反复冻融循环。
 
工作溶液的制备
Fluo-8E AM 染料上样溶液：
将 10 μL Fluo-8E™™ AM 储备溶液加入 5 mL 检测缓冲液 （1X） 中，并充分混合。注意：该工作溶液在室温下可稳定至少2小时。
 
 
实验方案样本

1. 向细胞板中加入 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 Fluo-8E™ AM 染料负载溶液。不要从细胞板上去除生长培养基。
2. 将染料上样板在 5% CO 中孵育₂37^oC的培养箱45 - 60 分钟。
3. 用HHBS或所需的缓冲液制备钙刺激器溶液（5X）。
4. 加入 50 μL 准备好的刺激器，并通过在底部读数模式下监测 Ex/Em = 490/525 nm（截止 = 515 nm）处的荧光强度立即运行钙通量测定。注意：为了获得最佳结果，重要的是在加入激动剂后1分钟内运行测定。同样重要的是，要确保所有样品从添加激动剂到实际读数开始之间的时间保持不变。