产品说明：
钙通量测定是药物发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。Screen Quest™ Fluo-8 NW钙检测试剂盒提供了一种基于荧光的均质检测试剂盒，用于检测细胞内钙动员。表达通过钙发出信号的目标GPCR的细胞预装了我们专有的Fluo-8 NW，它可以穿过细胞膜。Fluo-8 NW是可用于HTS筛查的最亮的钙指示剂。一旦进入细胞，Fluo-8 AM的亲脂性封闭基团被非特异性细胞酯酶切割，导致带负电荷的荧光染料留在细胞内，并且其荧光在与钙结合时大大增强。当细胞用筛选化合物刺激时，受体发出细胞内钙释放的信号，这大大增加了Fluo-8 NW的荧光。其波长长、灵敏度高和荧光增加 100-250 倍（当它与钙形成复合物时）的特点使 Fluo-8 NW 成为测量细胞钙的理想指标。该 Screen Quest Fluo-8 NW 钙检测试剂盒提供了一种优化的检测方法，用于监测 G 蛋白偶联受体 （GPCR） 和钙通道。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。
组件
组件 A：Fluo-8 NW 1 瓶，冻干
组件B：10X Pluronic® F127 Plus 1 瓶 （1 mL）
组分C：HHBS(Hanks' buffer with 20 mM Hepes) 1 瓶 （9mL）
示例协议
协议摘要
重要说明
在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Fluo-8 NW储备溶液：
将20 μL（用于货号#36314）或200μL（用于货号#36315和#36316）的DMSO加入Fluo-8 NW（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：20 μL Fluo-8 NW 储备溶液足以用于一个板。未使用的Fluo-8 NW储备溶液可以等分并储存在< -20oC超过一个月，如果管子密封严密。避光避光，避免反复冻融循环。
2. 检测缓冲液 （1X）：
a） 用于猫。 # 36314（1 个板套件）和 # 36315（10 个板套件），通过将 1 mL HHBS（组分 C）加入 9X Pluronic® F10 Plus（127 mL，组分 B）中制成 1X 检测缓冲液，并将它们充分混合。
b） 对于 Cat. # 36316（100 板套件），通过将整瓶 1 X Pluronic F10 Plus（127 mL，组分 B）加入 10 mL HHBS 缓冲液（未包含在试剂盒中）中，并充分混合，制成 90X 测定缓冲液。注意：10 mL 的 1X 测定缓冲液足以用于一个板。将未使用的1X测定缓冲液等分并储存在< -20®oC. 避光，避免反复冻融循环
工作溶液的制备
Fluo-8 NW 染料上样溶液：
将 20 μL Fluo-8 NW 储备溶液加入 10 mL 1X 测定缓冲液中，并充分混合。注意：该工作溶液在室温下可稳定至少2小时。
实验方案样本
| 校正系数 （260 nm） 1.076 |
校正系数 （280 nm） 0.769 |
消光系数（厘米-1M-1) 23430 |
激发（纳米） 495 |
发射（纳米） 516 |
量子产率 0.161 |
钙通量测定是药物发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。Screen Quest™ Fluo-8 NW钙检测试剂盒提供了一种基于荧光的均质检测试剂盒，用于检测细胞内钙动员。表达通过钙发出信号的目标GPCR的细胞预装了我们专有的Fluo-8 NW，它可以穿过细胞膜。Fluo-8 NW是可用于HTS筛查的最亮的钙指示剂。一旦进入细胞，Fluo-8 AM的亲脂性封闭基团被非特异性细胞酯酶切割，导致带负电荷的荧光染料留在细胞内，并且其荧光在与钙结合时大大增强。当细胞用筛选化合物刺激时，受体发出细胞内钙释放的信号，这大大增加了Fluo-8 NW的荧光。其波长长、灵敏度高和荧光增加 100-250 倍（当它与钙形成复合物时）的特点使 Fluo-8 NW 成为测量细胞钙的理想指标。该 Screen Quest Fluo-8 NW 钙检测试剂盒提供了一种优化的检测方法，用于监测 G 蛋白偶联受体 （GPCR） 和钙通道。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。
组件
组件 A：Fluo-8 NW 1 瓶，冻干
组件B：10X Pluronic® F127 Plus 1 瓶 （1 mL）
组分C：HHBS(Hanks' buffer with 20 mM Hepes) 1 瓶 （9mL）
示例协议
协议摘要
- 在含有1-5%FBS的生长培养基中制备细胞
- 加入 Fluo-8 NW 染料上样溶液（100 孔板为 96 μL/孔，25 孔板为 384 μL/孔）
- 在室温下孵育1小时
- 监测Ex/Em = 490/525 nm处的荧光强度
重要说明
在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
1. Fluo-8 NW储备溶液：
将20 μL（用于货号#36314）或200μL（用于货号#36315和#36316）的DMSO加入Fluo-8 NW（组分A）的小瓶中，并充分混合。 注意：20 μL Fluo-8 NW 储备溶液足以用于一个板。未使用的Fluo-8 NW储备溶液可以等分并储存在< -20oC超过一个月，如果管子密封严密。避光避光，避免反复冻融循环。
2. 检测缓冲液 （1X）：
a） 用于猫。 # 36314（1 个板套件）和 # 36315（10 个板套件），通过将 1 mL HHBS（组分 C）加入 9X Pluronic® F10 Plus（127 mL，组分 B）中制成 1X 检测缓冲液，并将它们充分混合。
b） 对于 Cat. # 36316（100 板套件），通过将整瓶 1 X Pluronic F10 Plus（127 mL，组分 B）加入 10 mL HHBS 缓冲液（未包含在试剂盒中）中，并充分混合，制成 90X 测定缓冲液。注意：10 mL 的 1X 测定缓冲液足以用于一个板。将未使用的1X测定缓冲液等分并储存在< -20®oC. 避光，避免反复冻融循环
工作溶液的制备
Fluo-8 NW 染料上样溶液：
将 20 μL Fluo-8 NW 储备溶液加入 10 mL 1X 测定缓冲液中，并充分混合。注意：该工作溶液在室温下可稳定至少2小时。
实验方案样本
- 将 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）的 Fluo-8 NW 染料负载溶液添加到细胞板中。[我们为那些喜欢保留培养基去除步骤的人提供 2 个单独的培养基去除钙检测试剂盒（Cat.# 36308 和 36309）。
- 将染料上样板在细胞培养箱中孵育30分钟，然后在室温下再孵育板30分钟。注意：如果检测需要 37oC、立即进行实验，无需进一步室温孵育。注意：如果细胞在室温下可以长时间很好地发挥作用，请将细胞板在室温下孵育1-2小时（建议孵育时间不超过2小时）。
- 用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。
- 通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来运行钙通量测定。注意：在实验之前运行信号测试很重要。不同的仪器都有自己的强度范围。将信号测试强度调整到最大仪器强度计数的10%至15%的水平。例如，FLIPR-384的最大荧光强度计数为65，000，因此应调整仪器设置，使信号测试强度在7，000至10，000左右。