产品说明：

激发（纳米） 493

发射（纳米） 515

量子产率 0.751

 
钙通量测定是药物发现中筛选G蛋白偶联受体（GPCR）的首选方法。Screen Quest™ Calbryte-520 无丙磺舒和免洗钙检测试剂盒为检测细胞内钙动员提供了最强大的基于荧光的均质检测试剂盒。表达通过钙发出信号的目标GPCR的细胞预加载了我们专有的Calbryte-520™ AM，它可以穿过细胞膜。Calbryte-520™ AM是可用于HTS筛查的最亮钙指示剂。一旦进入细胞，Calbryte-520™ AM的亲脂性封闭基团被非特异性细胞酯酶切割，导致带负电荷的荧光染料留在细胞内，其荧光在与钙结合时大大增强。当细胞受到筛选化合物的刺激时，受体发出细胞内钙释放的信号，这大大增加了Calbryte-520™ AM的荧光。其出色的细胞保留，高灵敏度和100-250倍荧光增加（当它与钙形成复合物时）的特点使Calbryte-520™ AM成为测量细胞钙的理想指标。Calbryte-520™ AM是唯一不需要丙磺舒以获得更好细胞保留的钙染料。这款 Screen Quest™ Calbryte-520 无丙磺舒和免洗钙检测试剂盒为监测具有脆弱或困难细胞系的 G 蛋白偶联受体 （GPCR） 和钙通道提供了最优化的检测方法。该测定可以以方便的 96 孔或 384 孔微量滴定板形式进行，并且易于适应自动化。
 
组件
组件 A：Calbryte™ 520 AM                 1 瓶
组件B：10X Pluronic® F127 Plus     1 瓶 （1 mL）
组分C：HHBS(Hanks' buffer with 20 mM Hepes)     1 瓶 （9mL）
 
示例协议
 
协议摘要
 

1. 在生长培养基中制备细胞
2. 加入Calbryte™ 520 AM染料上样溶液（100孔板为96 μL/孔，25孔板为384 μL/孔）
3. 在室温或37°C下孵育30-60分钟
4. 在Ex/Em = 490/525 nm处监测荧光

 
重要说明
在开始实验之前，请在室温下解冻所有组分。
 
储备液的制备
除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。避免反复冻融循环。
 
1. Calbryte™ 520 AM 储备溶液
将 20 μL（货号 # 36317）或 200 μL（货号 # 36318 和 # 36319）的 DMSO 加入 Calbryte™ 520 AM（组分 A）的小瓶中，并充分混合。
注意 20 μL Calbryte™ 520 AM 储备溶液足以用于一个板。如果管密封牢固，未使用的Calbryte™ 520 AM储备溶液可以等分并在<-20°C下储存一个月以上。
注意避光，避免反复冻融循环。
 
2. 检测缓冲液 （1X）
将 9 mL HHBS（组分 C，未包含在套件中，分类 # 36319）与 1 mL 10X Pluronic F127 Plus （10X）（组分 B）混合均匀。
 
工作溶液的制备
Calbryte™ 520 AM 染料负载液
将 20 μL Calbryte™ 520 AM 储备溶液加入 10 mL 检测缓冲液 （1X） 中，并充分混合。
注意 此工作溶液在室温下至少可稳定保存 2 小时。
注意 10 mL 染料上样溶液足以用于一个 96 孔板。
 
实验方案样本

1. 将 100 μL/孔（96 孔板）或 25 μL/孔（384 孔板）Calbryte™ 520 AM 染料负载溶液添加到细胞板中。
2. 将染料上样板在细胞培养箱中孵育30-60分钟，然后在室温下再孵育板15-30分钟。注意：如果测定需要37°C，请立即进行实验，无需进一步室温孵育。如果细胞在室温下能长时间良好运作，请将细胞板在室温下孵育1小时（建议孵育时间不超过2小时。

注意 染料加载后不要清洗细胞。

3. 用HHBS或所需的缓冲液制备复合板。
4. 通过监测Ex / Em = 490 / 525nm处的荧光强度来运行钙通量测定。