71618 Script IV RT MasterMix ( for qPCR)

Script IV RT MasterMix

( Perfect for qPCR )

目录号:71618

产品内容

Components

71618-50

50 rxns (20 μl/rxn)

71618-100

100 rxns (20 μl/rxn)

5x RT Mix IV

200μl

400μl

RNase free H2O

1.5 ml

保存条件

-20℃保存，有效期 12 个月。

产品简介

Script IV RT MasterMix采用第四代高达60℃的全新高温逆转录酶，可以通读GC含量丰富，二级结构复杂的RNA模板，极大提高了逆转录效率，CT值一般提早2-3个循环。

5x RT Mix IV为一管式逆转录预混液，含有逆转录所需的所有试剂（Script IV Hˉ RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dTPrimer、dNTP Mixture、RT Buffer），并且，针对qPCR进行特别优化oligodT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的逆转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。

适用范围

第一链cDNA合成，尤其高GC含量，复杂模板的cDNA合成。可用于高拷贝、低拷贝基因的检测。

注意事项

1．避免RNase污染。

2．为保证反转录成功，建议使用高质量的RNA样品。

3． 5x RT Mix IV含有甘油比较粘稠，容易吸附在管壁和吸头外，导致损失，使用前请点甩离心后取用。 5x RT Mix IV包含的酶过量，即使每次分别按照3.8 μl使用，也不影响使用效果。

4． 20 μl逆转录反应体系建议加入不超过1μg的Total RNA。如果目的基因的表达量非常低，最多加入5 μg Total RNA，否则，RNA量过高，可能会超出后续qPCR的线性范围。

5．本产品适用于包含Ploy (A)结构的真核生物mRNA和不包含Ploy (A)结构的原核生物RNA、真核生物rRNA和tRNA等模板，但不适用于miRNA等小RNA模板。

6．如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，推荐使用变性步骤，即在操作步骤之前，将模板RNA在65℃孵育5 min后迅速转移到冰上，再加RNA模板和RNase free H2O，混匀，50°C孵育15 min进行逆转录。

第一连 cDNA 合成 (以 20 μl 反应体系为例)

重要提示：操作前，请将各组分轻弹混匀，点甩离心后置冰上备用。

1．反应体系的配制

于冰上，在PCR管中，加入以下组分：

Components	Volume
Total RNA / mRNA	50ng ~ 1μg / 5ng ~ 100ng
5x RT Mix IV	4 μl
RNase-free H2O	To 20 μl

2．轻柔吸打混匀，50℃孵育15 min，进行逆转录反应。

3． 85°C加热5 sec，终止反应。

逆转录产物可立即用于qPCR反应，或保存于-20°C，并在半年内使用；长期存放，请分装后存于-70°C。

qPCR

建议取1~2μl cDNA产物原液作为20μl qPCR反应体系的模板。

如果基因表达量比较高，请根据实际情况适当稀释cDNA模板后使用。

Script IV RT MasterMix ( for qPCR)
Script IV RT MasterMix ( for qPCR)
产品编号：	71618	CAS号：
分子式：		分子量：
EINECS编号：