2x SYBR Green qPCR Mix（With 100x ROX）
目录号:71519
产品内容
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Components |
71519-500 500 rxns (20 μl/rxn) |
71519-2500 2500 rxns (20 μl/rxn) |
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2x SYBR Green qPCR Mix |
1.25 ml x4 |
1.25 ml x20 |
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100x ROX |
100 μl |
100 μl x5 |
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RNase-Free H2O |
5 ml |
5 ml x5 |
保存条件
-20℃保存，有效期 24 个月, 使用前充分融解，轻柔颠倒混匀。短期使用可放在 4 ℃，避免反复冻融。
产品简介
2x SYBR Green qPCR Mix是SYBR Green I 嵌合染料法专用的qPCR试剂，为2x 预混液，包含除引物和DNA样品以外的所有qPCR组分，可减少操作步骤，缩短加样时间，降低污染几率。其核心组分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶，配合精心优化的Buffer体系，有效抑制非特异性扩增，可对宽广浓度范围的模板进行准确定量，获得稳定可靠的qPCR结果，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。
本产品含有独立包装参比染料100x ROX（50µmol/µl），用于消除信号本底以及校正孔与孔之间产生的荧光信号误差，不同仪器所需ROX Reference Dye浓度不同，见下表。
快捷用法:
1. 需要高浓度ROX的机型（终浓度为0.5 µmol/µl）：每1.25ml 2x SYBR Green qPCR mix加入25µl 100x ROX，充分混匀后，可以直接使用。
2. 需要低浓度ROX的机型（终浓度为0.05 µmol/µl）：每1.25ml 2x SYBR Green qPCR mix加入2.5µl 100x ROX，充分混匀后，可以直接使用。
操作步骤：
1. 将DNA模板、引物、2 x SYBR Green qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上备用。
2. 冰上配制qPCR反应体系：（以20μl反应体系为例）
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Components |
Volume (20μl) |
Final Concentration |
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2x SYBR Green qPCR Mix |
10 μl |
1× |
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DNA Template |
Variable |
As required |
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Forward Primer (10μM) |
0.4 μl |
0.2 μM each |
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Reverse Primer (10μM) |
0.4 μl |
0.2 μM each |
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RNase-Free H2O |
Up to 20 μl |
Not applicable |
注意：
1） 推荐模板加样量为1-2 μl / 20μl反应体系，cDNA原液≤总反应体系的10%，基因组DNA的量为10 - 100 ng。因不同种类的DNA模板中含有的靶基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。
2） 通常推荐引物浓度为0.2 μM，就可以得到较好的结果，反应效果不佳时可在0.1 - 1.0 μM范围内进行调整。扩增效率不高的情况下，可提高引物浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
3） 举例为常规PCR反应体系和反应程序，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
3. qPCR反应程序
注意：
1） 本产品兼容性强，绝大多数情况下使用二步法和三步法均可获得良好效果。建议采用两步法qPCR反应
程序。一般来说，二步法扩增特异性高，三步法扩增效率高。如果融链曲线较差，可以尝试两步法扩增
或提高退火温度；如果因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试加长延伸时间或者进行三步法PCR扩增。
2） 根据引物的Tm值进行退火&延伸（退火）温度的设定；
3） 延伸（退火&延伸）时间的设置还需要根据您所使用的qPCR仪所需要的最短数据采集时间自行调整。
4） 融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。