lncRNAqPCR Kit (SYBR Green)

lncRNA 荧光定量检测试剂盒 (SYBR Green) 

目录号:71503

产品内容

保存条件

-20℃保存，有效期 24 个月。使用前，充分融解，轻轻颠倒混匀，短期使用可放在 4 ℃，避免反复冻融。

产品简介

与 mRNA 相比，lncRNA 具有丰度低、GC含量差异大、二级结构更复杂等特性，传统定量试剂对 lncRNA 难以达到理想的效果。本试剂盒中的 2× Universal lncRNA SYBR qPCR Mix是专门为 lncRNA 定量检测而研发的新一代预混形式的荧光定量 PCR 检测试剂，其中的DNA Polymerase 采用的是抗体修饰的热启动形式，确保本产品在保证较高的反应特异性的情况下具有更高的检测灵敏度。此外，Buffer 中添加了的 H-competitor 因子和 EP 组分，使得本产品具有广泛的样本普适性，对不同GC含量的模板、具有复杂高级结构的模板、PCR 抑制剂残留较多的模板以及长片段模板等具有非常好的扩增适用性，特别适合高级结构相对复杂，整体丰度相对较低的 lncRNA 的定量检测。

预混液中含有通用型ROX，适用于所有qPCR仪，使用qPCR Mix时不需要额外添加ROX来校正仪器。

操作步骤：

1. 将DNA模板、引物、2 x Universal lncRNA SYBR qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上备用。

2. 冰上配制qPCR反应体系：（以20μl反应体系为例）

注意：

1） 推荐模板加样量为1-2μl / 20μl反应体系，cDNA原液≤总反应体系的10%。因不同种类的DNA模板中含有的靶基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。

2） 通常推荐引物浓度为0.2 μM，就可以得到较好的结果，反应效果不佳时可在0.1 - 1.0 μM范围内进行调整。

扩增效率不高的情况下，可提高引物浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

3. qPCR反应程序

注意：

1） 本产品兼容性强，绝大多数情况下使用二步法和三步法均可获得良好效果。一般来说，二步法扩增特异性高，三步法扩增效率高。如果融链曲线较差，可以尝试两步法扩增或提高退火温度；如果因使用Tm 值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试加长延伸时间或者进行三步法PCR扩增。

2） 根据引物的Tm值进行退火&延伸（退火）温度的设定；

3） 延伸（退火&延伸）时间的设置还需要根据您所使用的qPCR仪所需要的最短数据采集时间自行调整。

4） 融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。

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