2×Universal probe qPCR Mix(UDG+)

2x Universal Probe qPCR Mix (UDG+)

目录号：71400

产品内容

Components

71400-500

500 rxns(20μl/rxn)

71400-2500

2500rxns(20μl/rxn)

2x Universal Probe qPCR Mix (UDG+)

1.25 ml x4

1.25 ml x20

RNase-Free H2O

5 ml

5 ml x5

保存条件

-20℃保存，有效期 24 个月。使用前，充分融解，轻轻颠倒混匀，短期使用可放在 4 ℃，避免反复冻融。

产品简介

2x Universal Probe qPCR Mix(UDG+)是探针法专用的qPCR试剂，为2x预混液，试剂中引入了dNTP/UDG防污染系统，可消除扩增产物污染对qPCR的影响。适用于DNA或cDNA的靶序列检测、基因表达分析、拷贝数分析、SNP分型等。

其核心组分是全新的Hotmaster Taq DNA聚合酶，配合精心优化的Buffer体系，有效抑制非特异性扩增，可对宽广浓度范围的模板进行准确定量，获得稳定可靠的qPCR结果，具有灵敏度高、特异性强、稳定性好等特点。

预混液中已添加有通用型ROX，适用于各种qPCR仪，使用时不需要额外添加ROX来校正仪器。

操作步骤：

1. 将DNA模板、引物、探针、2 x Universal Probe qPCR Mix、RNase-Free H2O溶解并置于冰上备用。

2. 冰上配制qPCR反应体系：（以20μl反应体系为例）

Components	Volume (20μl)	Final Concentration
2 x Universal Probe qPCR Mix (UDG+)	10 μl	1×
DNA Template	Variable	As required
Forward Primer (10μM)	0.5 μl	0.25 μM each
Reverse Primer (10μM)	0.5 μl	0.25 μM each
Probe (10μM)	0.5 μl	0.25 μM each
RNase free H2O	Up to 20 μl	Not applicable

1）推荐模板加样量为1-2μl / 20μl反应体系，cDNA原液≤总反应体系的10%，基因组DNA的量为10-100 ng。因不同种类的DNA模板中含有的靶基因拷贝数不同，可对模板进行梯度稀释，以确定最佳的模板使用量。

2）通常引物浓度为0.25 μM，就可以得到较好的结果，反应效果不佳时可在0.1 - 1.0 μM范围内进行调整。扩增效率不高的情况下，可提高引物浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。

3. qPCR反应程序

注意：

1）本产品兼容性强，绝大多数情况下使用二步法和三步法均可获得良好效果。一般来说，二步法扩增特异性高，三步法扩增效率高。如果融链曲线较差，可以尝试两步法扩增或提高退火温度；如果因使用Tm值较低的引物等原因，得不到良好的实验结果时，可尝试加长延伸时间或者进行三步法PCR扩增。

2）根据引物的Tm值进行退火&延伸（退火）温度的设定；

3）延伸（退火&延伸）时间的设置还需要根据您所使用的qPCR仪所需要的最短数据采集时间自行调整。

4）融解曲线分析请以所使用的荧光定量PCR仪推荐的程序进行设定。