RNase-Free DNase Set II
DNase I 快速 DNA 消化试剂盒
目录号：91415
产品内容
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产品成份 |
保存 |
250 次 （91415-250） |
1000 次 （91415-1000） |
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DNase I（1U/μl） |
-20℃ |
0.25 ml |
1 ml |
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10×DNase Buffer |
-20℃ |
0.25 ml |
1 ml |
产品简介
DNase I，即Deoxyribonuclease I，中文名称为脱氧核糖核酸酶I，是一种可以消化单链或双链DNA产生单脱氧核苷酸或单链或双链的寡脱氧核苷酸的核酸内切酶。DNase I水解单链或双链DNA后的产物，5'端为磷酸基团，3'端为羟基。DNase I活性依赖于钙离子，并能被镁离子或二价锰离子激活。镁离子存在条件下，DNase I可随机剪切双链DNA的任意位点；二价锰离子存在条件下，DNase I可在同一位点剪切DNA双链，形成平末端，或1-2个核苷酸突出的粘末端。
产品特点
本产品使用本公司特有的DNase和独特的反应液消化后不需要繁琐的苯酚/氯仿抽提灭活；也不需要在加热灭活前加入EDTA，避免了在RNA中引入EDTA抑制下游的反转录反应，使用起来非常快速，方便。
适用范围
制备不含DNA的RNA样品； RT-PCR反应前RNA样品中去除基因组DNA等可能的DNA污染； 体外T7, T3, SP6等RNAPolymerases催化的RNA转录后去除DNA模板；DNase I footprinting研究DNA-蛋白质相互作用；缺口平移(nick translatioin)；产生DNA随机片断文库；细胞凋亡TUNEL检测中部分剪切基因组DNA作为阳性对照。
注意事项：
每 1μg RNA使用1 unit DNase I。如果RNA少于1μg，使用1 unit DNase I。如果使用RNA大于1μg，需要根据RNA的处理量按比例放大DNase I、10×DNase Buffer使用量和反应体积。
操作步骤
1. 在 RNAse free 管里面加入以下成分。
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RNA |
1 μg (<8μl) |
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10×DNase Buffer |
1 μl |
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DNase I |
1 μl |
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RNAse free water |
Up to 10 μl |
2. 37℃孵育 30 分钟。
3. 65℃孵育 10 分钟，灭活 DNase I。
4. 取适量或者全部 10μl 的处理过的 RNA 直接用于 RT、RT-qPCR。
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