Taq DNA Polymerase (Buffer 含 Mg2+)
目录号：71011
产品内容
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产品成份 |
71011-0500 |
71011-03000 |
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Taq DNA Polymeras（5U/µl） |
500 U |
3000 U |
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10× Taq Buffer+（with Mgcl2） |
1 ml |
6×1ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。
经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
Taq DNA Polymerase 是从克隆有 Thermu aquaticus DNA Polymerase 基因的大肠杆菌经诱导表后分离纯化的，其分子量为94 KD。 Taq DNA Polymerase具有5′-3′DNA聚合酶活性和5′-3′外切核酸酶活性，无 3′-5′外切酶活性。在PCR反应中，Taq DNA Polymerase 延伸速度为1-2 kb/ 分钟，产物3′端带A，可直接用于TA载体克隆（Cat#V114）。
活性单位:
1 单位（U）Taq DNA Polymerase 活性定义为在 74℃、30 分钟内，
以活性化的大马哈鱼精子 DNA 作为模板引物，将 10 nmol 脱氧核苷酸掺入
到酸不溶物质所需的酶量。
质量控制:
SDS-PAGE 检测纯度大于 99%，经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法 检测无宿主残余 DNA，能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一 周，无明显活性改变。
酶贮存缓冲液：
20mM Tris-HCl (pH8.0)，0.1 mM EDTA，1mM DTT，100 mM KCl，Stabilizers，50% glycerol。
10×Taq Buffer (含Mg2+)：
200 mM Tris-HCl (pH 8.4)，200 mM KCl， 100 mM(NH4)2 SO4，15 mM MgCl2，其他成分。
适用范围：
一般用于DNA片断的PCR扩增、DNA标记、引物延伸、序列测定、平末端加A等，产物可以直接用于TA载体克隆。
Taq DNA Polymerase 的使用说明：
一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
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Component |
20 μl Reaction |
50 μl Reaction |
终浓度 |
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Template DNA |
as required |
as required |
10pg-0.5μg |
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Forward Primer (10 M) |
0.4 μl |
1 μ |
0.2 μM |
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Reverse Primer (10 μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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10×Buffer+（withmgcl2） |
2 μl |
5 μ |
1 × |
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dNTP Mixture(各2.5mM) |
1.6 μ |
4 μl |
0.2 μM |
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Taq DNA polymerase(5U/μl) |
0.2-0.4 μl |
0.5-1 μl |
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ddH2O |
up to 20 μl |
up to 50 μ |
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参考模板用量（50 μl 反应体系）：
质粒：0.1-10 ng；细菌基因组：10-100 ng；人类基因组：50-150 ng；cDNA：1-5 μl from RT。
一、 设置 PCR 循环条件：（请根据实际情况适当调整）
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Step |
Temperature |
Tim |
Cycle Number |
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Initialdenaturation |
94℃ |
3 minutes |
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Denaturation |
94℃ |
30 seconds |
30-35 cycles |
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Annealing |
55℃ |
30 seconds |
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Extension |
72℃ |
1-2 kb / minute |
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Final Extension |
72℃ |
5 minutes |
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4-8℃ |
Hold |
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三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。