KOD DNA Polymerase (含超纯 dNTP)
目录号:71516
产品内容
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产品成份 |
71516-250 |
71516-1000 |
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KOD DNA Polymerase（5U/µl） |
250 U |
500 U |
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10× KOD Buffer |
1 ml |
1 ml |
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SuperPure dNTP mix（10 mM） |
0.1 ml |
0.2 ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。
产品简介
KOD DNA Polymerase 是从克隆有Thermococcus Kodakaraensis DNA聚合酶基因的质粒在大肠杆菌中经诱导表达分离纯化而来。该酶所具有的超强3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNA Polymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR 产物，扩增所得的DNA为平末端，可直接用于Blunt (平末端)载体克隆（Cat#V116、V117），也可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。
活性单位:
KOD DNA Polymerase 活性定义为在 75°C 活性测定条件下，在 30 min内摄入 10nmoles 的 dNTPs 使成为酸性不溶物时所需要酶的活性定义为1U。
质量控制:
SDS-PAGE 检测纯度大于 99%，经检测无外源核酸酶活性；PCR 方法检测无宿主残余 DNA，能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。
适用范围：
用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变分析（SNP）和平末端补平等。
注意事项：
高保真KOD对于dNTP纯度要求很高，因此建议用本酶配套的超纯dNTP mix。
KOD DNA Polymerase的使用说明：
一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
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Component |
50 μl Reaction |
终浓度 |
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Template DNA |
as required |
10pg-0.5μg |
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Forward Primer (10 μM) |
1 μl |
0.2 μM |
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Reverse Primer (10 μM) |
1 μl |
0.2 μM |
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10× KOD Buffer |
5 μl |
1× |
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SuperPure dNTP mix（10 mM） |
1 μ |
0.2 mM |
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KOD DNA polymerase(5U/μl) |
0.25-0.5 μl( 1.25-2.5 U) |
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ddH2O |
up to 50 μl |
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参考模板用量（50 μl 反应体系）：
质粒：5-20 ng；细菌基因组：10-100 ng；人类基因组：50-100 ng；cDNA：1-2 μl 。
注意：用 ddH2O 补足反应体系（体积）至 50 μl。实际操作中，首先要计算好需要补加ddH2O 的量以后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底，然后将反应管置于 PCR 仪中进行扩增。
二、设置 PCR 循环条件：（请根据实际情况适当调整）
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Step |
Temperature |
Time |
Cycle Number |
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Initial denaturation |
94℃ |
3 minutes |
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Denaturation |
94℃ |
20-30 seconds |
30-35 cycles |
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Annealing |
50-60℃ |
20-30 seconds |
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Extension |
72℃ |
1-4kb / minute |
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Final Extension |
72℃ |
5 minutes |
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4-8℃ |
Hold |
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注意：一般情况下，Annealing Temperature = Tm - 5°C
如果扩增片段小于 4 kb，建议 KOD 酶的延伸速度为 1kb / 15 sec；
如果扩增片段大于 4 kb，建议延伸速度为 1kb / 20-30 sec。
三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。