2× LongHiFi PCR Master Mix (含染料)
目录号:71814
产品内容
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产品成份 |
71814-05 |
71814-0100 |
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2× LongHiFi PCR Master Mix |
5× 1 ml |
100× 1 ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。
经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
2× LongHiFi PCR Mix为多种采用最先进基因工程改造而来的超保真酶添加延伸因子混合而成，极大的提高了扩增长度、扩增速度、保真性和产量。2× LongHiFi PCR Mix是长片段、超保真、快速扩增的首选产品。
PCR产物为平末端，不需要加A头，可直接用 Blunt平末端系列载体克隆。
本产品包含LongHiFi DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×。使用时，只需加入模板、引物，并补足水至Mix终浓度为1×即可。
本制品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、荧光测序等后续操作。
产品特点
1. 高产：一般 PCR 产物量比传统产量高 50%-100%！
2. 高效：延伸速度可以达到 3-4kb/min，是 pfu 的 6-8 倍！
3. 高成功率：对于高 GC 模板和特殊结构的复杂模板有良好效果！
4. 超高保真：保真度是 taq 的 81 倍以上。
5. 扩增长度长：以复杂基因组 DNA 为模板扩增可达 10kb，以简单基因组、质粒和噬菌体 DNA 为模板扩增可达 15kb。
2 × LongHiFi PCR Master Mix 使用说明：
一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
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Component |
20 μl Reaction |
50 μl Reaction |
终浓度 |
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2× LongHiFi PCR Mix |
10 μl |
25 μl |
1 × |
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Forward Primer (10 μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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Reverse Primer (10 μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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Template DNA |
as required |
as required |
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ddH2O |
up to 20 μl |
up to 50 μl |
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参考模板用量：（以 50 μl 反应体系为例）
质粒：0.1-10 ng；
细菌基因组：10-100 ng；
人类基因组：50-150 ng；
cDNA：1-5 μl from RT。
注意：实际操作中，首先要计算好需要补加 ddH2O 的量以后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后加 LongHiFi PCR Mix，瞬离，上机。
二、设置 PCR 循环条件：（请根据实际情况适当调整）
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Step |
Temperature |
Time |
Cycle Number |
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Initial denaturation |
94℃ |
3 minutes |
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Denaturation |
94℃ |
10 seconds |
30-35 cycles |
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Annealing |
50-60℃ |
10-15 seconds |
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Extension |
72℃ |
15-20 seconds /kb |
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Final Extension |
72℃ |
5 minutes |
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4-8℃ |
Hold |
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注意：一般情况下，Annealing Temperature = Tm - 5°C
1. 质粒和简单基因组等简单模板，可以采用 10-15 sec/kb；复杂模板 ( 如人类基因组 DNA )，可以采用 20-25 sec/kb。
2. 对于高 GC 含量的模板，预变性和变性温度可以提高到 98℃。
3. 如果电泳发现主带上下拖尾模糊现象，或者泳道出现从上样孔拖下来的涂抹带现象，一般提示延伸时间过长，梯度缩短延伸时间（建议 10-15sec/kb 为梯度减少延伸时间）直到获得满意结果。
三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。