2× KOD PCR Master Mix (含染料)
目录号:71517
产品内容
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产品成份 |
71517-05 |
71517-0100 |
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2× KOD PCR Master Mix |
5× 1 ml |
100× 1 ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
本产品包含KOD DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。该酶所具有的超强3’→ 5’外切酶活性使得其保真性比Pfu DNA Polymerase 更高，保真性是Taq DNA Polymerase的80倍，同时具有合成速度快的特点，聚合速度约为普通Pfu DNA Polymerase的5倍，Taq DNAPolymerase的2倍，达到100-138bp/秒，可以在短时间内获得高产量的扩增产物，特别适合于高保真地扩增6kb以内的PCR 产物，扩增所得的DNA为平末端，可用于基因克隆、表达及突变分析等分子生物学实验。
KOD扩增的PCR产物为平末端（Blunt），可直接用于Blunt载体克隆（Cat#V116、V117）
本产品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、测序等后续操作。
产品特点
1. 高产：产量是普通 Taq 酶的 2 倍！
2. 高效：延伸速度 100-138bp/sec！
3. 高成功率：对于高 GC 模板和特殊结构的复杂模板有良好效果！
2 × KOD PCR Master Mix 使用说明：
一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
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Component |
20 μl Reaction |
50 μl Reaction |
终浓度 |
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2× KOD PCR Master Mix |
10 μl |
25 μl |
1 × |
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Forward Primer(10 μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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Reverse Primer(10 μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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Template DNA |
<0.2 μg |
<0.5 μg |
as required |
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ddH2O |
up to 20 μl |
up to 50 μl |
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参考模板用量：（以 50 μl 反应体系为例）
质粒：0.1-10 ng；
细菌基因组：10-100 ng；
人类基因组：50-150 ng；
cDNA：1-5 μl from RT。
注意：用 ddH2O 补足反应体系（体积）至 50 μl。实际操作中，首先要计算好需要补加 ddH2O 的量以后，建议先加水，然后按上述顺序添加其它成分，最后添加 KOD DNA Polymerase。充分混匀后，离心数秒使反应混合物沉到管底，然后将反应管置于 PCR 仪中进行扩增。
二、设置 PCR 循环条件：（请根据实际情况适当调整）
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Step |
Temperature |
Time |
Cycle Number |
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Initialdenaturation |
94℃ |
3 minutes |
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Denaturation |
94℃ |
20-30 seconds |
30-35 cycles |
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Annealing |
50-60℃ |
20-30 seconds |
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Extension |
72℃ |
1-4kb / minute |
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Final Extension |
72℃ |
5 minutes |
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4-8℃ |
Hold |
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注意：一般情况下，Annealing Temperature = Tm - 5°C
如果扩增片段小于 4 kb，建议 KOD 酶的延伸速度为 1kb / 15 sec；
如果扩增片段大于 4 kb，建议延伸速度为 1kb / 20-30 sec。
三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。