2× Long Taq PCR Master Mix(含染料)
目录号：71115
产品内容
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产品成份 |
71115-05 |
71115-0100 |
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2× Long Taq PCR Master Mix |
5x 1ml |
100x 1ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
本产品包含Long Taq DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×，扩增速度（5-10s/kb）是普通Taq mix速度的6倍，保真度是Taq酶的3倍， 适用于扩增各种长达10Kb的DNA模板！PCR产物3’端带A头，纯化后可直接用于TA载体克隆（Cat#42114-20）。
本产品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、测序等后续操作。
产品特点
1. 高产：产量是普通 Taq 酶的 2 倍！
2. 高效：延伸速度 5-10s/kb，一般 0.5 小时完成 PCR！
3. 高成功率：对于高 GC 模板和特殊结构的复杂模板有良好效果！
2 × Long Taq PCR Master Mix 使用说明：
一、 配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
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Component |
20μlReaction |
50 μl Reaction |
FinalConcentration |
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2×Long Taq PCR Mix |
10 μ |
25 μ |
1 × |
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Forward Primer(10 μM) |
0.8 μ |
2 μl |
0.4 μM |
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Reverse Primer (10 μM) |
0.8 μl |
2 μ |
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Template DNA |
as required |
as required |
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ddH2O |
up to 20 μl |
up to 50 μl |
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参考模板用量（50 μl 反应体系）：
质粒：0.1-10 ng；细菌基因组：10-100 ng；人类基因组：0.1-1 μg；cDNA：1-5 μl 。
二、建议 PCR 循环条件：
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Step |
Temperature |
Time |
Cycle Number |
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Initialdenaturation |
94℃ |
3 minutes |
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Denaturation |
94℃ |
15 seconds |
30-35 cycles |
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Annealing |
55℃ |
30 seconds |
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Extension |
72℃ |
60 seconds / kb |
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Final Extension |
72℃ |
5 minutes |
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4-8℃ |
Hold |
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注意事项：
扩增长片段，引物一般终浓度为 0.3-1μM，长度最好为 27-36bp；退火温度一般在 65℃-70℃，使用 2 步扩增法，即退火/延伸合为一步；如果设计的引物在 20bp 左右，则使用 3 步扩增法为好。扩增效果不佳时，还可加入 DMSO 到终浓度 2-4%。