2× PFU PCR Master Mix(含染料)

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产品内容

保存条件

-20℃保存，有效期 2 年。经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。

产品简介

本产品包含Pfu DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2、反应缓冲液，浓度为2×。 保真度是Taq酶的54倍，用于高保真PCR反应、复杂模板如GC含量高(>60%)， 有二级结构等的扩增和大规模的基因检测。

PCR产物为平末端，纯化后可直接用于Blunt载体克隆（Cat#V116、 V117）。

本产品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、测序等后续操作。

适用范围：

高保真DNA扩增:如表达基因的克隆、基因的定点突变、细胞内基因点突变的分析(SNP)和末端补平。

基因检测：适合大规模基因检测，半定量PCR实验和微量DNA的检测。

产品特点

具有快速简便、灵敏度高、特异性强、稳定性好等优点，可最大限度的减少人为误差。

{C}2   × Pfu PCR Master Mix 使用说明：

一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)

参考模板用量（50 μl 反应体系）：

质粒：0.1-10 ng；细菌基因组：10-100 ng；人类基因组：50-150 ng；cDNA：1-5 μl 。

二、建议 PCR 循环条件：

注意：如果扩增片段≤4 kb，建议延伸速度为 1kb / min；片段＞4 kb，建议 0.5kb / min。

注意事项：

a. Pfu酶具有3′-5′的外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度比Taq酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，如果扩增片段小于4 kb，建议Pfu酶的延伸速度为1kb/ min；如果扩增片段大于4 kb，建议延伸速度为0.5kb / min。同时Pfu酶的3′-5′的外切酶活性可能降解引物， 所以应先加dNTP后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。

b. 用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm在55－80℃ 之间，引物浓度在0.1-0.5 μM之间，比Taq酶略高。

c. Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。

三、结果检测：反应结束后取 5 µl 反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。