2× Lightning Taq PCR Master Mix(含染料)
目录号:71800
产品内容
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产品成份 |
71800-05 |
71800-0100 |
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2× Lightning Taq PCR Master Mix |
5x 1ml |
100x 1ml |
保存条件
-20℃保存，有效期 2 年。经常使用，可置于 4 °C 保存，有效期 3 个月。
产品简介
本产品包含Lightning Taq DNA Polymerase、dNTPs和优化的反应缓冲液，浓度为2×，扩增速度（5-10s/kb）是普通Taq mix速度的6倍，保真度是Taq酶的3倍， 适用于扩增各种小于6Kb的DNA模板！PCR产物3’端带A头，纯化后可直接用于TA载体克隆（Cat#42114-20）。
本产品含红色示踪染料，不需添加上样缓冲液即可直接上样进行电泳；也可经过纯化处理，以用于酶切、连接、测序等后续操作。
产品特点
1. 高产：产量是普通 Taq 酶的 2 倍！
2. 高效：延伸速度 5-10s/kb，一般 0.5 小时完成 PCR！
3. 高成功率：对于高 GC 模板和特殊结构的复杂模板有良好效果！
2 × Lightning Taq PCR Master Mix 使用说明：
一、配制 PCR 反应体系：(于冰上配制)
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Component |
20 μl Reaction |
50 μl Reaction |
FinalConcentration |
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2× LightningTaqPCRMix |
10 μl |
25 μl |
1 × |
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Forward Primer (10μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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Reverse Primer (10μM) |
0.4 μl |
1 μl |
0.2 μM |
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Template DNA |
as required |
as required |
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ddH2O |
up to 20 μ |
up to 50 μ |
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参考模板用量（50 μl 反应体系）：
质粒：0.1-10 ng；细菌基因组：10-100 ng；人类基因组：50-150 ng；cDNA：1-5 μl 。
二、建议 PCR 循环条件：
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Step |
Temperature |
Time |
Cycle Number |
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Initial denaturation |
94℃ |
3 minutes |
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Denaturation |
94℃ |
10 seconds |
25-35 cycles |
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Annealing |
55℃ |
10 seconds |
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Extension |
72℃ |
10 seconds / kb |
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Final Extension |
72℃ |
5 minutes |
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4-8℃ |
Hold |
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注意事项：
a. 片段≥3kb 或产量较低时，可以采用 15-20 秒/kb 的延伸速度或采用较多循环数。
b. 对于高 GC 含量或者有二级结构的模板，应该适当延长预变性时间到 5 分钟，变性时间可以适当提高 5-10 秒。扩增效果不佳时，还可加入 DMSO 到终浓度 1-8%。