Universal Total RNA Kit通用型总 RNA 提取试剂盒 

目录号：91013

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15 ~ 25℃）

产品简介

采用 Trizol 试剂与离心吸附柱结合提取总RNA的方法，简化了RNA提取的流程，与经典的异丙醇沉淀法相比，柱式纯化方法简便，去除杂质能力更强，大大提高了 RNA 的纯度。该试剂盒可从各种细胞或组织（动物、植物、血液）中快速提取总 RNA，每个吸附柱每次可处理 50-100 mg 组织或 5×10⁶ 细胞，可同时处理大量不同样品。一个小时内即可完成反应，提取的总RNA没有 DNA 和蛋白的污染，可用于 Northern Blot、Dot Blot、PolyA 筛选、体外翻译、RNase 保护分析和分子克隆。

产品特点

1. RNA 纯度更高；

2. 应用广泛：可提取多种不同的样本材料。

3. 本公司生产的 Universal Total RNA Kit 质量优异，可以完美替代 Thermo的 TRIzol Plus RNA Purfication Kit。

4. 可在常温下提取 RNA，不需要 4℃离心机；亦可以兼容 4℃离心机。

注意事项

1. RNA 在裂解液 RL 中时不会被 RNase 降解，但后续处理过程中应使用不含RNase的吸头和玻璃器皿，璃器皿可在150℃烘烤4 h，塑料器皿可在 0.5 M NaOH 中浸泡 10 min，然后用水彻底洗净，再高压灭菌。

2. 样品应避免反复冻融，否则会影响 RNA 的提取得率和质量。

3. 样品加入裂解液 RL（RNAzol）匀浆后，加氯仿前，样品可在–80℃保存一个月以上。

4. 取 RNA 样本时，把新鲜组织样本浸入 RNAsafe (RNA 样品保存液，91115-100)中，可在 37℃保存一天，在 25℃保存一周，在 4℃保存一个月，在-20℃或者–80℃长期保存。

操作步骤

第一次使用前，请先在漂洗液 RW 中加入指定量无水乙醇，详见瓶上的标签。

提示：所有离心步骤均可在室温（15~37℃）下进行，提取效果更佳！

1. 材料处理：

a．组织（动物、植物、真菌）：将组织在液氮中磨成细粉。每 30~50 mg 动物组织加 1ml 裂解液RL，每50~100 mg植物/真菌组织加 1ml 裂解液RL，涡旋 15sec。样品体积不应超过裂解液RL体积的10%。

b．单层贴壁培养细胞：吸去培养液，加入适量裂解液RL，每 10cm2 加1ml裂解液RL，用移液器抽打几次。

c． 细胞悬液：离心收集细胞，弃上清，每 5×10⁶ 个细胞加1ml裂解液RL。加裂解液 RL 前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。

d．血液：取新鲜血液，加入5倍体积裂解液RL，（推荐0.2ml血液+1 ml 裂解液 RL ），充分振荡混匀。

2. 将匀浆样品在室温下放置 5 min，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 可选步骤：12,000 rpm 离心 5 min，转移上清至一新的离心管中。

（注意：如果样品中含有较多蛋白、脂肪、多糖或肌肉、植物结节部位等可加此步骤离心去除，离心得到的沉淀中含有细胞外膜、多糖、高分子 DNA 等，RNA 存在于上清液中）

4. 向上清（或裂解液混合液）中加入等体积的无水乙醇，混匀，此时可能会出现沉淀，每次将≤750 ul 溶液和沉淀一起转入RNA吸附柱中，12,000rpm离心1 min，倒弃滤液，若一次不能转移完全，可分次转移。

5. 向吸附柱内加入500 ul 去蛋白液 RE，12,000 rpm 离心 1 min，倒弃

滤液。

6. 向吸附柱内加入500ul漂洗液RW，12,000rpm离心1 min，弃滤液。

（注意：请检查漂洗液 RW 中是否已按要求加入无水乙醇！）

7. 重复步骤 6 一次。

8. 将RNA吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 离心 2min，甩干膜上残

留的乙醇。

9. 取出RNA吸附柱，放入一个新的RNase-Free 1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加50~100ul RNase-Free ddH₂O，室温放置2min，12,000 rpm离心1 min，管底即RNA 溶液。

10. 提取的RNA可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以防降解。

相关产品： 

71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71711-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (适用于所有 qPCR 仪)