Gel DNA Purification Kit

琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒

目录号:43011

产品内容：

自备试剂：

无水乙醇

保存条件：

室温（15 ~ 25℃）

产品简介：

本试剂盒适用于从 TAE 或 TBE 琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段，使用本产品可回收 100bp-10kb 大小的DNA 片段，回收率可达 85%-95%。该试剂盒操作简便，得到的 DNA 片段可用于酶切、连接、测序等实验。

产品特点：

{C}1.         快速：步骤少，操作简便，整个操作仅需 15 分钟。

{C}2.          高效：每个离心吸附柱可吸附 10 ug 以上的 DNA 片段，回收效率在 85%以上。

注意事项：

{C}1.   {C}Buffer BL 的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。收到货后 2 个月内，不用做柱平衡。

{C}2.   {C}使用前请先检查Buffer BL、Buffer DB 是否出现浑浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

{C}3.   切胶时，紫外照射时间应尽量短，以免对 DNA 造成损伤。

{C}4.   回收率与初始 DNA 量和洗脱体积有关，初始量越少、洗脱体积越小，回收率越低。

操作步骤

第一次使用前，请先在 Buffer WB 中加入无水乙醇，并打对勾标记，加入体积请参照瓶上的标签。

从琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段

{C}1. {C}柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 100 ul Buffer BL，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）

{C}2.  切胶：在长波紫外灯下，用干净刀片将目的 DNA 条带切下，尽量切除不含 DNA 的凝胶。

{C}3.     称重：将切下的含有目的 DNA 条带的凝胶，放入 1.5 ml 离心管中，称取凝胶重量（去除空管重量）。如果凝胶重量为 100mg，其体积可视为 100ul。

{C}4.  溶胶：加入 3 倍体积 Buffer DB，56℃水浴，直到凝胶完全溶解，期间颠倒混匀 2 次加速溶胶。

（如果凝胶浓度大于 2%，应加入 6 倍体积 Buffer DB。对于回收<100 bp 的小片段，可在凝胶完全溶解后，再加入 1.5 倍胶块体积的异丙醇以提高回收率。）

{C}5.  吸附：待溶液冷却至室温后加入吸附柱中，室温静置 1 min，然后 12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

（如果总体积超过 750 ul，可分 2 次将溶液加入同一离心吸附柱中）

{C}6.  漂洗：加入 600 ul 漂洗液Buffer WB，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

{C}7.  二次漂洗：重复操作步骤 6。

{C}8.  干燥：将吸附柱放回收集管中， 12,000 rpm 离心 2 min，甩干膜上残留的乙醇，防止其抑制下游反应。

{C}9.     回收：将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 离心管中，在吸附柱中央加入 30 ~ 50 ul 洗脱液 Buffer EB，室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 1 min 收集 DNA 片段。

（注意：为增加回收效率，可将洗脱液在 65℃预热，也可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置 2 min，再次离心收集。）