Oligo Purification Kit

寡核苷酸纯化回收试剂盒

目录号:43014

产品内容：

自备试剂：

无水乙醇

保存条件：

室温（15 ~ 25℃）

产品简介：

本试剂盒使用特殊的结合缓冲液能够高效纯化>15nt 的单链或者双链 DNA 和 RNA。特别适用于从标记反应（地高辛标记，同位素标记，生物素标记等）混合物中回收小片段标记探针，去除未反应的核苷酸、短 oligos、染料、酶、盐离子等。典型的回收率高达 80-90%，每个离心吸附柱每次可吸附的 DNA  量为 10µg  。使用本试剂盒回收的 RNA 或者 DNA 可适用于 in Situ Hybridization、Northern blot、RNAi、Gel shift assay、 Ligation、Sequencing、Microarray analysis 等实验。

产品特点：

1.        快速：步骤少，操作简便，整个操作仅需 15 分钟。

2.        高效：独特配方使本产品比一般试剂盒回收效率大大提高，并且不会抑制下游反应。

3.        适用范围广：适用于回收单链或者双链 DNA 和 RNA。虽然本试剂盒推荐用于回收小片段或者寡聚核苷酸(>15nt)，但是也可以高效回收<10kb 的较大片段 DNA 或者 RNA。

注意事项：

1.   Buffer BL 的加入能够改善吸附柱的吸附能力并提高吸附柱的均一性和稳定性，消除高温潮湿或其他不良环境因素对吸附柱造成的影响。收到货后 2 个月内，不用做柱平衡。

2.   使用前请先检查Buffer BL、Buffer OB 是否出现浑浊，如有混浊现象，可在 37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

操作步骤

第一次使用前，请先在 Buffer RW 瓶中加入无水乙醇，并打对勾标记，加入体积请参照瓶上的标签。第一次使用前，请先在 Buffer OB 瓶中加入异丙醇! 加入体积请参照瓶上的标签。

1.  柱平衡：向吸附柱中（吸附柱放入收集管中）加入 100 ul 平衡液 Buffer BL，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，将吸附柱重新放回收集管中。（请使用当天处理过的柱子）

2.   加结合液：估计样品体积，向其中加入 10 倍体积结合液Buffer OB，温和地充分混匀。

（注意：如果回收的片段>100bp，只需要加 5 倍体积 Buffer OB。）

（注意：如果样本体积小于 50ul,用 RNase-Free H2O 补齐 50ul,以提高回收效率。）

3.   吸附：将上一步所得溶液加入一套吸附柱中，室温放置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

（ 注意：吸附柱容积为 750ul，若样品体积大于 750ul 可分批加入）

4.   漂洗：加入 500ul Buffer RW，12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液。

5.  二次漂洗：重复操作步骤 4。

6.  干燥：将离心吸附柱于 12,000 rpm 离心 2 min，甩干残留漂洗液。

7.   洗脱：将离心吸附柱置于一个新的 1.5 ml 离心管中，在吸附柱中央加入 30 ~ 50 ul RNase-Free H2O，室温放置 2 min，12,000 rpm 离心 1 min，收集 DNA 片段。

（注意：为增加回收效率，可将洗脱液在 60℃预热，也可将得到的溶液重新加入到离心管中，室温放置 2 min，再次离心收集。）