高效动物组织/细胞总 RNA 提取试剂盒

FlashPure Plus Tissue/Cell Total RNA Mini Kit 

 

目录号：91451

产品内容

产品成份	91451-50（50 次）
裂解液 ACL Plus	30 ml
去蛋白液 RW1	40 ml
漂洗液 RW	10 ml（需加入指定量无水乙醇）
RNase-Free H2O	10 ml
DNA 清除/RNA 吸附通用柱	100 套
RNase-Free 1.5 ml 离心管	50 支

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15 ~ 25℃），有效期 12 个月。

产品简介

适用于快速提取各种动物组织、细胞的总 RNA，采用 gDNA 过滤器，高效滤除gDNA，不需要繁琐的DNase I消化过程，提取的RNA，可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE、芯片等。

产品特点

1. 无毒：免氯仿、免β-巯基乙醇！

2. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全过程仅需 10 min！

重要提示：

① 第一次使用前，请先在漂洗液 RW 中加入无水乙醇，详见瓶身标签。

② 所有离心步骤均需要在室温（15~25℃）下进行。

③ 肝脏、脾脏、肾脏、胰腺、心脏的样本投入量不要超过 10 mg。

操作步骤：

1. 动物组织：

a．电动匀浆：取新鲜组织 10~25 mg，加入 500μl 裂解液 ACL Plus，电动匀浆，直到无明显组织块即可。

b．液氮研磨：在液氮中研磨组织成细粉，取 10~25 mg 组织细粉加入500μl裂解液 ACL Plus，剧烈涡旋振荡 20 sec，充分裂解。

c． 将匀浆后裂解物 13，000 rpm 离心 3 min。

d．下接步骤 3。

2. 细胞

a．悬浮细胞：离心收集细胞，加入500 μl裂解液 ACL Plus（<7x106 细胞），吹打混匀，剧烈涡旋振荡 20 sec，充分裂解。

b．贴壁细胞：吸弃细胞培养基，可以直接在培养皿中加裂解液 ACL Plus进行消化、裂解；或先用胰酶消化后离心收集细胞，再加入裂解液，每<7x106细胞加入 500 μl 裂解液 ACL Plus，吹打混匀，涡旋振荡至无明显细胞团，使其充分裂解。

贴壁细胞培养数量表：

培养器皿 24 孔培养板 6 孔培养板	面积（cm2） 2 9.6	培养液量（ml）1.0 2.5	细胞数量 5×105 2.5×106
3.5cm 培养皿	8	3.0	2×106
6cm 培养皿 25cm 培养瓶 100cm 玻璃培养瓶	21 25 33	5.0 5.0 10	5.2×106 5×106 7 x 106

3. 将裂解物上清或者裂解物全部加到 DNA 清除/RNA 吸附通用柱中（以下简称通用柱），13,000 rpm 离心 1 min，丢弃通用柱的内管，

保留滤液（RNA 在滤液中）。

4. 向滤液中加入0.5倍体积（通常为 250 μl）的无水乙醇，吹打混匀。

5. 将滤液混合物全部加入一个通用柱中，13,000 rpm 离心1 min，倒弃

滤液。此时，RNA被吸附在膜上。

6. 加入700μl去蛋白液 RW1,室温放置1min,13,000 rpm 离心 30 sec，

倒弃滤液。

7. 加入500μl漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

8. 重复步骤 7。

9. 把通用柱放回收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，彻底除去膜上残留

的乙醇。

10. 取出通用柱，放入新的 RNase-free 1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央

悬空滴加 30-50μl RNase-Free H2O（事先在 70-90℃水浴中加热可提

高产量），室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。

11. 得到的 RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。

附录：

一、免液氮直接研磨（自动研磨仪）——适用于新鲜样本

a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入 4 mm 两粒，加 500 μl 裂解液 ACL

plus，放进 20 mg 左右的样本，设置 65 个频率，震荡 2 min。

b. 将裂解物 13,000 rpm 离心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。

二、液氮研磨（自动研磨仪）:

a. 把研磨模块丢到液氮中预冷，直到没有气泡冒出视为预冷完毕。

b. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3mm 钢珠 3 粒，放进 20-30mg 样本，

投入液氮中预冷。

c. 把预冷好的离心管插入研磨模块中，放进研磨仪，设置 55 个频率，

震荡 30~60 sec。（以北京赫得研磨仪——京 N9548 为例）

d. 研磨完成后，马上加 500 μl 裂解液 ACL Plus，剧烈涡旋振荡,充分

混匀。

e. 将裂解物 13,000 rpm 离心 3 min，沉淀不能裂解的碎片。

 

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