果实/种子总 RNA 提取试剂盒

Fruit / Seed Total RNA Mini Kit 

目录号：91513

产品内容

保存条件

室温（15 ~ 25℃），有效期 12 个月。

自备试剂

无水乙醇，β-巯基乙醇

产品简介

适用于快速提取果实、种子、中草药的总 RNA，gDNA 过滤器能高效滤除 gDNA， RNA 可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、普通转录组测序、RACE、芯片等。

成功案例：稻谷种子、玉米种子、小麦种子、葡萄果实、板栗、樱桃、草莓、芒果、百合鳞茎、唐菖蒲的球茎、中草药的块根...

如果遇到果实、种子、中草药，例如：多糖多酚巨高的作物种子（小麦/玉米/大豆/水稻）、葡萄果实、蓝莓果实、百合鳞茎、土豆块茎；或者次级代谢产物巨丰富的葛根、虎杖、雪莲等药用植物，请选择 91513-果实种子总RNA 提取试剂盒。

产品特点

1. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全过程仅需 30min！

注意事项

1. 如果 FSL 有析出或者沉淀，请将其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用。

2. 样品应避免反复冻融，否则会影响 RNA 的提取得率和质量。

操作步骤：

重要提示：

① 第一次使用前请先在漂洗液 RW 中加入无水乙醇，加入量详见瓶身标签。

② 操作前，取 1ml 裂解液 FSL 至 2.0ml 离心管内，加入 5%的 β-巯基乙醇

（例如：1ml FSL 加 50μl β-巯基乙醇），颠倒混匀后，65℃水浴中预热。多个样本按比例放大准备。

③ β-巯基乙醇是裂解液 FSL 的关键成分，必要的时候可以提高终浓度到10～20%，来防止样品褐化。如果碰到特别复杂的植物，可以尝试在裂解液中再加入 PVP40 至终浓度 2%。

④ 所有离心步骤均需要在室温（15℃～25℃）下进行。

1. 材料处理：

a．将植物样本在液氮中迅速研磨成细粉。

b．转移 30～200 mg 细粉至 65℃预热的裂解液 FSL（已加有 β-巯基乙醇）中，立即剧烈涡旋震荡 30 Sec，充分混匀。

注意：水分多的样品（如草莓、西瓜果肉）投入 150～200 mg； 水分含量少的样品（如成熟的小麦/玉米/大豆种子）投入 30～40 mg； 淀粉含量高的块茎投入 40～80mg；叶片投入 50～100 mg。

c．短暂回放至 65℃水浴 5 min，中间偶尔颠倒 1～2 次，帮助裂解。

d．将裂解物 13,000 rpm 离心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

e．转移上清（约 800~900 μl）至新的 2.0 ml 离心管中，加入 0.5 倍体积的无水乙醇（约 400~450 μl），吹打混匀。

2. 每次转移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 过滤器中（过滤器放入收集管），13,000 rpm 离心 2 min，倒弃滤液。重复此过程，直到混合液全部转入gDNA 过滤器。此时，绝大部分 gDNA 被滤除，RNA和少量gDNA残留被吸附在膜上。

3. 取出步骤2的gDNA过滤器，放入一个新的2.0 ml离心管中，加入500 μl 裂解液 ARL，13,000 rpm 离心 30 sec，收集滤液（RNA 在滤液中），向滤液中加入 250μl 无水乙醇，吹打混匀。

4. 将滤液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 2 min，倒弃滤液。此时，RNA 被吸附在膜上。

5. 加入700μl 去蛋白液 RW1，室温放置1min，13,000 rpm 离心30sec，倒弃滤液。

6. 加入500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

7. 重复步骤6一次。

8. 将RNA吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心2 min，除去膜上残留的乙醇。

9. 取出RNA吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 离心管中，向 RNA 吸附膜的中央悬空滴加 30~50μl的RNase-free H₂O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心1min。

10. 提取的总 RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。

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