FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit

细菌总 RNA 快速提取试剂盒（免氯仿）

目录号：91018

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

溶菌酶，常温运输， 4℃保存；其他组分，室温（15 ~ 25℃）保存。

产品简介

FlashPure Bacteria Total RNA Mini Kit 是专用于提取细菌（G+、G-）的总 RNA，全新的裂解液没有任何味道，提取过程也不需要使用氯仿，提取的产量和纯度媲美进口一线品牌。得到的 RNA，可直接用于 RT、RT-PCR、RT-qPCR、RACE、全转录组测序、芯片等。

产品特点

1. 无毒：免氯仿、免β-巯基乙醇！

2. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

3. 高效：提取全过程仅需 10 min！

注意事项

1. 样品应避免反复冻融，否则会影响 RNA 的提取得率和质量。

2. 样品加入裂解液 BRL Plus 匀浆后，样品可在–80℃保存一个月以上。

3. 提取过程应使用不含 RNase 的吸头和器皿。

重要提示：

① 第一次使用前，请先在漂洗液 RW 中加入无水乙醇，详见瓶身的标签。

② 每次操作前，请先配制添加了溶菌酶或者 Lysostaphin 的 TE (PH 8.0)，终浓度为 1mg/ml。

③ 所有离心步骤均需要在室温（15~25℃）下进行。

操作步骤：

1. 离心收集 1~2 ml 菌液(108~109细胞)到一个 1.5 ml 离心管, 尽可能彻底吸弃上清。

2. 根据细胞的种类和数量，充分重悬细胞在 100 μl ( 5x108细胞 ) / 200 μl

( 5x108~7.5x108细胞 ) TE 中（确保已添加溶菌酶或者 Lysostaphin 至TE 中，浓度为 1mg/ml )，或者直接用 TE 重悬后，用干净枪头挑取少许溶菌酶加入。

3. 室温(15~25℃)温育5min/溶菌酶, 或者37℃温育15min / Lysostaphin，破解细胞壁。每 2 min 涡旋振荡 10 sec，帮助破壁。

注意：各种细菌破壁的难易程度不一样，一般革兰氏阴性菌 E.coli 使用上面的条件就足够了，甚至可能省略该步骤，但是某些革兰氏阳性菌如B. subtilis 难破壁需要提高溶菌酶浓度到 15mg/ml 和温育时间到10min。如果金黄色葡萄球菌需要加入 lysostaphin 到 1mg/ml，37℃温育 15min。总之不同细菌类型破壁难易程度不同，有的难破壁的种类

需要根据用户自己的具体情况调节酶的种类、工作浓度和温育温度、时间，此外还可以联合使用玻璃珠击打，机械破壁，蛋白酶 K 消化等方法帮助破壁。

4. 加入350μl裂解液 BRL（ 如果上面使用 100 μl TE/酶 ）或者700μl裂解液 BRL（如果上面使用 200 μl TE/酶），吹打混匀后，用手剧烈振荡20 秒，充分裂解。

5. 加入 250 μl 无水乙醇（曾加入 100 μl TE / 350 μl BRL 管）或者 500 μl无水乙醇（曾加入200μl TE / 700μl BRL 管），立即吹打混匀。

6. 每次转移≤750 μl 滤液混合液至 RNA 吸附柱中（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 离心 1 min，倒弃滤液。此时，RNA 被吸附在膜上，重复此过程，直到溶液全部上柱。

7. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1min，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

8. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

9. 重复步骤 8 一次。

10. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去乙醇。

11. 取出 RNA 吸附柱，放入一个新的 RNase-free 1.5 ml 离心管中，向 RNA吸附膜的中央悬空滴加 30-50 μl RNase-free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。

12. 得到的 RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。

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