FlashPure FFPE Total RNA Mini Kit

石蜡包埋组织总 RNA 快速提取试剂盒

目录号：91310

产品内容

自备试剂

无水乙醇、二甲苯

保存条件

室温（15 ~ 25℃）

产品简介

适用于快速从福尔马林固定、石蜡包埋组织样品中提取总RNA，提取的RNA，可用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE等。

产品特点

1. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全过程仅需 30 min！

操作步骤

第一次使用前，请先在漂洗液 RW 和 70%乙醇中加入指定量无水乙醇，详见瓶身的标签。

提示：所有离心步骤必须在室温（15~25℃）下进行。

1. 修整去除过量包埋组织外石蜡，并切成 5~20 μm 厚切片，开始的 2~3片抛弃不用。

2. 收集总厚度不超过■40 μm 的石蜡切片到一个 2.0 ml 离心管中（例如：2 片 20μm、4 片 10μm、8 片 5μm 的石蜡切片），或者不超过▲80 μm的石蜡切片到一个 2.0 ml 离心管中。

■代表处理切片总厚度≤40 μm，▲代表处理切片总厚度≤80 μm

3. 加入 1 ml 100%二甲苯，涡旋振荡 10 sec。瞬间离心把组织全部浸入到二甲苯。

4. 50℃水浴 3 min 熔解石蜡，20~25℃最高速离心 2 min，收集到管底。

5. 小心吸弃上清二甲苯，注意不要吸到沉淀。

6. 加入 1 ml 无水乙醇，涡旋振荡，最高速离心 2 min，小心吸弃上清乙醇。

7. 加入 1ml 无水乙醇，重复步骤 6 一遍，尽可能吸弃所有乙醇。

8. 室温或者 37℃晾干乙醇 10 min，或直到所有乙醇挥发干。

乙醇完全晾干非常重要，微量的乙醇残留也会导致 RNA 产量降低。

9. 加入■150 μl ▲240 μl 裂解液 PKD，涡旋振荡（或者吹打），充分重悬组织沉淀，短暂离心收集液体到管底，加入 10 μl 蛋白酶 K，吹打混匀。

10. 55℃孵育 15min，然后 80 ℃孵育 15min。

55℃孵育后，可以将离心管取出放置在室温，等水浴锅温度升到 80℃后

再放入水浴锅，精确的孵育 15min。即使 2min 的延长也可能导致 RNA

的部分降解。

11. 加入■320 μl ▲500 μl 结合液 RBC，充分吹打混匀，调节结合条件。

12. 转移混合液至 gDNA 过滤器中，14,000 rpm 离心 30 sec，收集滤液

（RNA 在滤液中）。

应避免吸到较大的未消化完全的絮团物质上柱，以免堵塞离心柱。

13. 加入■720 μl ▲1200 μl 无水乙醇到滤过液中，吹打混匀。

14. 将≤750 μl 滤液混合液加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。此时，RNA 被吸附在膜上。重复此过程，直到溶液全部上柱。

15. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

16. 重复步骤 15 一次。

17. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去乙醇。

18. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase~free1.5 ml 离心管中，向 RNA 吸附膜的中央悬空滴加 30 μl 的 RNase~free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。

19. 提取的总 RNA，可直接用于下游实验，或于~70℃保存，以免降解。

相关产品：

71118~100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）

71710~100 Script III All~in~one RT Mix with dsDNase（for qPCR）

71600~500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (适用于所有qPCR仪)