FlashPure Bone Total RNA Mini Kit

骨组织 RNA 快速提取试剂盒(带 gDNA 过滤器)

目录号：91514

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15 ~ 25℃），有效期 12 个月。

产品简介

骨组织坚硬、骨细胞密度低、而且外周基质含有大量黏蛋白（蛋白多糖）和 RNA 难以分离，无法用传统 Trizol 法进行高质量提取。

本产品适用于快速提取骨组织细胞的总 RNA，利用多年研制而成的骨组织专用裂解液，并添加多种成分去除骨组织蛋白多糖，采用高效的 gDNA 过滤器，不需要繁琐的 DNase I消化，提取的 RNA，可直接用于 RT、RT-PCR、RACE、RT-qPCR、普通转录组测序、芯片等。

产品特点

1. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！

2. 高效：提取全过程仅需 30min！

注意事项

1. 如果 FSL 有析出或者沉淀，请将其置于 65℃水浴中，重新溶解后使用。

2. 样品应避免反复冻融，否则会影响 RNA 的提取得率和质量。

操作步骤：

提示：

① 第一次使用前请先在漂洗液 RW 中加入无水乙醇，加入量详见瓶身标签。

② 操作前，取 1 ml 裂解液 FSL 至 2.0 ml 离心管内，加入 10 %的 Boneaid，

（例如：1ml FSL 加 100 μl Boneaid），颠倒混匀后，65℃水浴中预热。

多个样本按比例放大。

③ 所有离心步骤均需要在室温（15℃～25℃）下进行。

1. 液氮研磨法：

a．用骨钳夹碎骨组织，放入研钵（研钵在 180 度干烤 2 小时），在液氮中反复研磨成细粉。

注意：研磨时，要不断补加液氮，保证样本的研磨在液氮中进行。

b．转移 100 mg 细粉至 65℃预热的裂解液 FSL（已加有 Boneaid）中，立即剧烈涡旋震荡 30 Sec，充分混匀。

c． 下接步骤 3。

2. 其它骨组织破碎方法：

a． 取100mg骨组织加入1 ml预热的裂解液FSL（已加有 Boneaid）， 高速均质仪粉碎匀浆。或者取 100 mg 液氮冷冻包埋切片粉碎的骨头加入 1 ml 裂解液 FSL（已加有 Boneaid）粉碎匀浆。

b． 下接步骤 3。

3. 短暂回放至 65℃水浴 10 min，中间偶尔颠倒 1～2 次，帮助裂解。

4. 将裂解物 13,000 rpm 离心 5 ~10 min，沉淀不能裂解的碎片。

5. 转移上清至一个新的 2.0 ml 离心管中，加入 0.5 倍上清体积的无水乙醇，吹打混匀。

6. 每次转移≤750 μl 上清混合液至 gDNA 过滤器中（过滤器放入收集管），13,000 rpm 离心 2 min，倒弃滤液。此时，绝大部分 gDNA 被滤除，RNA 和少量 gDNA 残留被吸附在膜上，重复此过程，直到混合液全部转入 gDNA 过滤器。

7. 取出步骤 6 的 gDNA 过滤器，放入一个新的 2.0 ml 离心管中，加入500 μl 裂解液 PRL Plus，13,000 rpm 离心 1 min，收集滤液（RNA 在滤液中），向滤液中加入 250μl 无水乙醇，吹打混匀。

8. 将滤液混合物加入 RNA 吸附柱中，13,000 rpm 离心 2 min，倒弃滤液。此时，RNA 被吸附在膜上。

9. 加入 700 μl 去蛋白液 RW1，室温放置 1min，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

10. 加入 500 μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

11. 重复步骤 10 一次。

12. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去膜上残留的乙醇。

13. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 离心管中，向 RNA 吸附膜的中央悬空滴加 30~50 μl 的 RNase-free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。

14. 提取的总RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。

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