超微量总 RNA 快速提取试剂盒（带 DNase I）
FlashPure Total RNA micro Kit(With DNase I)
目录号：91516
产品内容
|
产品成份 |
保存 |
91516-50（50 次） |
|
裂解液 PRL |
室温 |
20 ml |
|
去蛋白液 RW1 |
室温 |
40 ml |
|
漂洗液 RW |
室温 |
10 ml（需加入指定量无水乙醇） |
|
RNase-Free H2O |
室温 |
5 ml |
|
糖酚去除剂 PAD |
室温 |
5 ml |
|
DNase I |
-20℃ |
100 μl |
|
DNase Buffer |
-20℃ |
1.25 ml |
|
超微量 RNA 吸附柱和收集管 |
室温 |
50 套 |
|
RNase-Free 1.5 ml 离心管 |
室温 |
50 支 |
|
RNase-Free 2.0 ml 液氮研磨管 |
室温 |
50 支 |
自备试剂
无水乙醇
产品简介
FlashPure Total RNA micro Kit是超微量总RNA提取的专用试剂盒，处理范围一般为细胞（1~106）或者组织（< 5mg）。
适用于从超微量的细胞、组织、昆虫、植物、细菌等样品中提取总 RNA。配有DNase I，在RNA吸附膜上消化gDNA，得到的RNA，无gDNA残留，可直接用于RT，RT-PCR，RT-qPCR，普通转录组测序、RACE等。
产品特点
1. 特殊微量 10 μg 离心柱设计，可以最低 6μl 洗脱，可提高 RNA 的浓度。
2. 特殊无垫圈离心柱设计，确保离心后无液体残留和污染，保证 RNA纯度。
3. 独有的糖酚去除剂 PAD 可以清除植物多糖多酚或者昆虫的糖原，几丁质多糖等杂质，提高富含杂质的昆虫和植物 RNA 的提取质量。
4. 无毒：免氯仿、免β-巯基乙醇！
5. 高质：28s/18s=2:1，OD260/280=2.0～2.2！
6. 高效：提取全过程仅需 30 min！
注意事项：
1. 所有离心步骤必须在室温（15~25℃）下进行。
2. 部分含多糖多酚、几丁质多糖或者次级代谢产物丰富的昆虫样品，或者植物样品，提取效果不佳（如降解）可以尝试在裂解液 PRL 中添加糖酚去除剂 PAD 后提取。具体添加比例为 10 体积（1ml）PRL：1 体积（100μl）糖酚去除剂 PAD。
3. 不是多糖多酚的材料不用加糖酚去除剂 PAD。
操作步骤
第一次使用前请先在漂洗液 RW 中加入指定量无水乙醇，详见瓶身的标签。
提示：
(一) 样品裂解匀浆：
a．组织（动物、植物、昆虫）：≤5 mg 组织加入 300 μl 裂解液 PRL，匀浆至无明显组织块。
b．贴壁细胞：无需消化，完全吸弃培养基后，直接在培养板/皿中加入裂解液 PRL 裂解细胞，并用移液枪反复吹打，帮助裂解。
（≤105 细胞加 100μl 裂解液 PRL，≤106 细胞加 300μl 裂解液 PRL）。
c．悬浮细胞：离心沉淀细胞(≤500 x g)，完全去除上清后用裂解液PRL 重悬细胞沉淀。可短暂涡旋振荡。
d．其它组织：其他难裂解的组织，细菌，酵母，植物匀浆需配合高速珠磨均质仪器和适合裂解珠（玻璃珠，钢珠，锆珠等）。
(二) 样品清理：
此步骤为可选步骤，主要是针对动植物组织和细胞，若研磨匀浆后不溶物碎片太多，可将裂解物 12,000 rpm 离心 1 min，沉淀裂解困难的碎片或者不溶物，将上清液转移至新的 1.5ml 离心管中。对于样品量很低（细胞数≤105）)或匀浆后能充分裂解的样品无需此步骤。
(三) 样品纯化：
1. 向裂解物或上清中加入等体积的无水乙醇到上一步的中吹打混匀。
2. 将上一步的混合液加入超微量 RNA 吸附柱（吸附柱放入收集管中），13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。此时，RNA 被吸附在膜上。
3. 加入 350 μl 去蛋白液 RW1，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
4. DNase I 工作液配制：取 20 μl DNase Buffer 和 2 μl DNase I 至新的RNase-Free 离心管中，轻轻吹打混匀。（处理多个样品，按照比例放大）
5. 向 RNA 吸附膜中央加入 22 μl 的 DNase I 工作液，室温放置 15 min。
6. 加入 350μl 去蛋白液 RW1，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
7. 加入 500μl 漂洗液 RW，13,000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
8. 重复步骤 7 一次。
9. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，13,000 rpm 离心 2 min，除去膜上残留的乙醇。
10. 取出 RNA 吸附柱，放入 RNase-free1.5 ml 离心管中，向 RNA 吸附膜的中央部位悬空滴加 30-50μl RNase-free H2O，室温放置 1 min，13,000 rpm 离心 1 min。
11. 提取的总 RNA，可直接用于下游实验，或于-70℃保存，以免降解。
相关产品：
71118-100 Script III 1st Strand cDNA Synthesis Kit（for PCR or qPCR）
71710-100 Script III All-in-one RT Mix with dsDNase（for qPCR）
71600-500 2x Universal SYBR Green qPCR Mix (适用于所有qPCR仪)
附录：
一、液氮研磨（自动研磨仪）—— 适用于各种样本
a. 把研磨模块也丢到液氮中预冷，直到没有气泡冒出视为预冷完毕。
b. 在 2.0 ml 液氮研磨管中放入 3 mm 钢珠 3 粒，放进≤50 mg 样本，投入液氮中预冷。
c. 把预冷好的离心管插入研磨模块中，放进研磨仪，设置 55 个频率， 震荡 30~60 sec。（以北京赫得京 N9548 为例）
d. 研磨完成后，马上加 550 μl 裂解液 RLA，剧烈涡旋 30 sec，混匀。
e. 将裂解物 13,000 rpm 离心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。
二、免液氮直接研磨（自动研磨仪）—— 适用于新鲜样本
a. 在 2.0 ml 液氮研磨管中加入 5 mm 钢珠 1 粒，加 1 ml 裂解液 RLA，放进≤100 mg 样本，设置 60 个频率，震荡 2 min。
b. 将裂解物 13,000 rpm 离心 5~10 min，沉淀不能裂解的碎片。