Blood miRNA Mini Kit

全血（液体样本）microRNA 快速提取试剂盒

目录号：91214

产品内容

自备试剂

无水乙醇

保存条件

室温（15 ~ 25℃）

产品简介

常见的离心柱型的 RNA Kit/总 RNA Kit 不能有效吸附回收 miRNA，Trizol 抽提法也不能有效沉淀回收 miRNA（生物通上有专题文章阐述）。

裂解液 RLS 是 RNAzol LS Reagent ( 同 Trizo LS ,是浓缩型的 Trizol )，配合 miRNA 专用的溶液体系，专用于快速提取全血、血浆、血清、脑脊液、尿液等液体样本的 miRNA 和其它各种小 RNA(15-30 nt )。

Blood miRNA Mini Kit 可以提出来包含 miRNA 的总 RNA，用于miRNA 的 RT、qPCR 检测，以及全转录组测序等；根据需要，也可以一次性把 miRNA 和总 RNA（mRNA、tRNA、rRNA）分别提出来。

产品特点

1. 本公司生产的 Blood miRNA mini Kit 质量优异，可以媲美进口品牌。

2. 本品可在常温下提取 RNA，不需要 4℃离心机；亦可以兼容 4℃离心机。

注意事项

1. Wash Solution 2/3 可能加入乙醇使用几天后，可能会出现沉淀晶体，并不影响使用，取其上清直接使用就可以。

2. 血液 RNA 的常温保存/运输/提取的简易方案：

临床取样：在临床上，使用抗凝管采血后，取 250 μl 新鲜血液，加入 750μl 的裂解液 RLS ( RNAzol LS Reagent，Cat#R012-100)，用移液枪反复抽打并振荡混匀，在室温裂解 5~10 min，直至血细胞充分发生裂解。

保存：经裂解后的血液可在-20℃下保存 1-2 个月，在-70℃保存半年。

运输：可冰袋 4℃运输 1 天，干冰-20℃运输一周。

提取：后续 RNA 提取按 R213（或 R012）的说明书进行。

3. RNA 纯度及浓度检测:

血清/血浆的 RNA 含量特别低，已经低于分光光度计测量的下限，无法准确测量，因此无法通过测量 OD 值或者比值的方法来判断浓度或者纯度，只能通过下游做 RT-qPCR 来判断产量。同时无细胞的血清/血浆中的 RNA 主要是小于 100 nt 的 miRNA，因此跑电泳检测 RNA 完整性并不适用于血清/血浆 RNA。

操作步骤

第一次使用前，先在 Wash Solution 1、Wash Solution 2/3、70%乙醇中加入无水乙醇，加入量详见瓶上的标签。

1. 每 250 μl 液体样品 (血清、血浆、脑脊液等)，加入 750 μl 裂解液 RLS，用移液器反复抽打几次，然后剧烈震荡 15 sec，充分混匀。（液体样品和裂解液 RLS 的终体积比总是 1：3）

注意：对于含有高污染物样品（如全血样品），可以用灭菌水按照 1：1的比例稀释一倍后开始提取。

2. 将匀浆样品在室温下放置 5 min，使得核酸蛋白复合物完全分离。

3. 加入 200 μl 氯仿，剧烈振荡 15 秒，并在室温下放置 2 分钟。

4. 于 4℃（或室温）13，000 rpm 离心 10 分钟。 样品会分成三层：下层有机相、中间层、上层无色的水相，RNA 存在于水相中。水相层的容量大约为所加裂解液 RLS 体积的 70%。

5. 转移上清（约 500 μl）至一个新的离心管中，加入 1.5 倍体积（750 μl）的无水乙醇，吹打混匀。

6. 每次转移≤750 μl上清混合液至RNA吸附柱中，12,000 rpm离心1 min，倒弃滤液。重复此过程，直到上清混合液全部上柱。

7. 向 RNA 吸附柱内加入 700 μl Wash Solution 1（检查是否已加入乙醇），12,000 rpm 离心 1 min，倒弃滤液。

8. 向 RNA吸附柱内加入 500 μl Wash Solution 2/3（检查是否已加入乙醇），12,000 rpm离心1 min，弃滤液。

9. 重复步骤 8 一次。

10. 将 RNA 吸附柱放回空收集管中，12,000 rpm 离心 2min，除去膜上残留的乙醇。

11. 取出 RNA 吸附柱，放入一个新的 RNase-Free 1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央部位悬空滴加 30~50 μl RNase-Free ddH2O，室温放置 1 min，12,000 rpm 离心 1 min，管底即包含 microRNA 的总 RNA。

附：microRNA 富集方法（仅仅提取 microRNA，不包含>200 nt 其它总

RNA 成份。一般不推荐）

注意：当非特异扩增较多或者扩增背景较高时，可以尝试使用富集方法提取的 microRNA。

1. 按照前面标准操作步骤 1－4 操作，直到得到上清。

2. 取上清（约 500 μl）至一个新的离心管，加入等体积 70％乙醇（必须是

室温的），吹打混匀，不要离心。

3. 取700 μl上清混合液，加入一个RNA吸附柱中，12,000 rpm离心1 min，收集滤液。并将滤液转移至一个新的离心管，然后把 RNA 吸附柱放回空的收集管内，再加入剩下的混合物，离心，收集滤液。

此时，滤液含有 microRNA, RNA 吸附柱的膜上是去除了 microRNA 的总RNA（mRNA、tRNA、rRNA 等大于 200nt 的 RNA），如果有需要，可以按照前面标准操作步骤 7－11 操作，漂洗、洗脱，得到去除了 microRNA 的总 RNA。

4. 较精确估计滤液体积，加入 0.65 倍体积无水乙醇（必须是室温的），吹打混匀，不要离心。

5. 将≤750 μl滤液混合物加入microRNA吸附柱中，12,000 rpm离心1min，micoRNA 被吸附在膜上，倒弃废液。重复此过程，直到所有溶液都上柱。

6. 按照前面标准操作步骤 7－11 操作，经漂洗，洗脱后，得到富集的microRNA。

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