FlashPure Tissue/Cell Genomic DNA Kit

动物组织/细胞基因组 DNA 提取试剂盒

（离心柱型）

目录号:40017

产品内容：

自备试剂:

     无水乙醇，RNase A（可选）

保存条件:

     室温（15~25℃）

     蛋白酶 K，室温可保存 6 个月，4℃保存 12 个月，- 20℃保存 2 年。

产品简介:

     适用于从动物组织、培养细胞中快速提取高质量的基因组DNA。

     本试剂盒采用独特的裂解液，利用硅胶膜特异吸附DNA，无需酚氯仿等 有毒试剂，也无需进行耗时的醇类沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性 杂质，得到基因组DNA，无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和杂 交等相关分子生物学实验。

产品特点:

{C}1.    简便快速：30 min 内可获得高纯度的基因组 DNA。

{C}2.   安全无毒：无需苯酚/氯仿抽提。

{C}3.   高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达 30～50 kb，可直接进行 PCR、 酶切和杂交等分子生物学实验。

注意事项:

{C}1.    如果裂解液TL、结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴 溶解，摇匀后使用。

{C}2.   开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。

{C}3.   洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使 用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱 （10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游 酶切反应，使用时可以适当稀释。

操作步骤:

第一次使用前，请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇，详见瓶身的标签。

提示：所有离心步骤必须在室温（15~25℃）下进行。

{C}1.    柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl 平衡液， 12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，将吸附柱重新放回收集管中。 （请使用当天处理过的柱子）

{C}2.    材料处理：

{C}a.     动物组织

将动物组织在液氮中研磨成细粉（或者用解剖刀切成小碎块），取约 25 mg 转入 1.5 ml 离心管中，加入 180 μl 裂解液 TL，再加入 20 μl 蛋白酶 K 溶 液，振荡至彻底悬浮，56℃水浴 1~3 小时，直至组织完全消化溶解。

推荐样本投入量：动物组织≤25 mg，动物脾脏≤10 mg。

鼠尾样本投入量：大鼠尾巴最大用量为 0.6 cm 长片段，小鼠鼠尾巴最大 用量为 1.2 cm 长片段，并将裂解时间延长至 6-8 小时。

注意：水浴过程中，每 10 分钟颠倒混匀一次，可促进细胞裂解。

{C}b.    培养细胞

①  105~ 106悬浮细胞到一个 1.5 ml 离心管；对于贴壁细胞，应该先 用胰蛋白酶消化后吹打下来收集。

②  13, 000 rpm 离心 10 sec，吸弃上清，留下细胞团和大约 10~20μl 残留的液体。

③  加入 200 μl 1× PBS，振荡至细胞充分悬浮，洗涤细胞去除杂质， 13, 000 rpm 离心 10 sec，完全吸弃上清。

④  再次加入 180 μl 1× PBS，振荡混匀，使细胞彻底悬浮。

⑤  加入 20 μl 蛋白酶 K 溶液，充分混匀。

{C}3.    （可选步骤）加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液，振荡混匀，室温 放置 5 ~ 10min。

{C}4.     加入200 μl结合液 CB，充分振荡混匀，70℃水浴或金属浴处理10 min。

{C}5.     冷却后加 100 μl 无水乙醇 (或异丙醇)，充分振荡混匀，此时可能会出 现絮状沉淀，     短暂离心以去除管盖内壁水珠。

{C}6.    将所得溶液和絮状沉淀加入一个 DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中） 13, 000 rpm 离心 1 min，DNA 被吸附在膜上，倒弃滤液。

{C}7.    加入 500 μl 抑制物去除液 IR，13, 000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

{C}8.    加入 600 μl 漂洗液 WB（请检查是否已加入无水乙醇），13, 000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。

{C}9.    重复步骤 9 一遍。

{C}10.   将 DNA 吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 离心 2 min，尽量除去 漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

{C}11.   取出 DNA 吸附柱，放入一个干净的 1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央 加入 100 μl 洗脱缓冲液 EB （洗脱缓冲液事先在 80 ~ 100℃水浴中预 热可以提高产量）， 室温放置 3 ~ 5 min，13, 000 rpm 离心 1 min。

{C}12.   DNA 可以存放在 2~ 8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。

相关产品：

50110-500 10000x GenGreen（同GelGreen） 无毒核酸染料 蓝光切胶仪用

50111-500 10000x GenRed（同GelRed） 无毒核酸染料 凝胶成像仪用

71800-05 2x Lightning Taq PCR MasterMix（含染料） 延伸速度：6 kb/min

71517-05 2x KOD PCR MasterMix（含染料） 扩增长度≤6kb 6 kb/min