FlashPure Blood Genomic DNA Kit
血液基因组 DNA 提取试剂盒
（离心柱型）
目录号:40110
产品内容：
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产品成分 |
40110-50（50 次） |
40110-100（100 次） |
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平衡液 |
5ml |
10ml |
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缓冲液 BB |
10ml |
20ml |
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结合液 CB |
11ml |
20ml |
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抑制物去除液IR |
25ml |
50ml |
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漂洗液WB |
13ml |
25ml |
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洗脱缓冲液 EB |
10ml |
15ml |
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蛋白酶 K 溶液 |
1ml |
2x 1 ml |
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DNA 吸附柱和收集管 |
50套 |
100套 |
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10x 红细胞裂解液（赠送） |
10ml |
20ml |
自备试剂：
无水乙醇，RNase A（可选）
保存条件：
室温（15~25℃）
蛋白酶 K，室温可保存 6 个月，4℃保存 12 个月，~ 20℃保存 2 年。
产品简介：
适用于从新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液样本中快速提取高质量的基因组DNA，也可以提取白膜层和血凝块。
本试剂盒采用独特的裂解液，利用硅胶膜特异吸附DNA，无需酚氯仿等有毒试剂，也无需进行耗时的醇类沉淀，最大限度的去除蛋白及其他抑制性杂质，得到基因组DNA，无蛋白、核酸酶污染，可直接进行PCR、酶切和杂交等相关分子生物学实验。
产品特点：
{C}1. 简便快速：30 min 内可获得高纯度的基因组 DNA。
{C}2. 安全无毒：无需苯酚/氯仿抽提。
{C}3. 高产：典型的产量 200µl 全血可提取出 3～6µg 基因组 DNA，
{C}4. 高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达 30～50 kb，可直接进行 PCR、酶切和杂交等分子生物学实验。
注意事项：
{C}1. 如果结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。
{C}2. 开始实验前将需要的水浴先预热到70℃备用。
{C}3. {C}为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。
{C}4. {C}不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，因此产量的个体差异也可能非常大。
{C}5. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA，不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱 DNA应该保存在－20℃。DNA如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱
（10mM Tris-HCl， 1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能下游酶切反应，使用时可以适当稀释
操作步骤：
第一次使用前，请先在漂洗液 WB 中加入指定量无水乙醇，详见瓶身的标签。提示：所有离心步骤必须在室温（15~25℃）下进行。
{C}1. 柱平衡：向吸附柱的膜中央（吸附柱放入收集管中）加入 100μl 平衡液，
12,000 rpm 离心 1 min，弃滤液，将吸附柱重新放回收集管中。
（请使用当天处理过的柱子）
{C}2. 取 200 μl 新鲜、冷冻或加入各种抗凝剂的血液，放入 1.5 ml 离心管。
▲如果血液起始量小于200 μl，则用1× PBS补足到200 μl。
如果起始量介于200μl-300μl之间，则需要按照比例增加试剂用量。
如果起始量介于300 μl~1 ml之间，则需要先进行红细胞裂解操作: 将 10x 红细胞裂解液用灭菌水稀释到1x，然后在样品中加入3倍体积的1x红细胞裂解液，颠倒混匀，室温放置10 min，期间再颠倒混匀几次。 13,000 rpm离心20 sec(对于1.5 ml离心管)或2,000 ~ 3,000 rpm离心5 min(对于15 ml离心管)，吸去上清，留下白细胞沉淀（如果看到的是大部分的红色细胞团，则再次加入3倍1x红细胞裂解液，重复裂解一次），加入200 μl 1× PBS，振荡至彻底悬浮。
▲提取凝固血时需要在操作前用枪头捣碎血凝块后按照正常步骤进行。
▲如果处理血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的抗凝血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量仅用5 ~ 20 μl，可加1× PBS 补足到200 μl后，进行下面的裂解步骤。
{C}3. （可选，一般不需要）如果需要去除 RNA，可向 200 μl 的血液样品中加入 5 μl RNase A (100mg/ml) 溶液，振荡混匀，室温放置 5 ~ 10 min。
{C}4. 加入 20 μl 蛋白酶K 溶液，充分振荡混匀。
{C}5. 加入 200 μl 结合液 CB，充分振荡混匀，70℃放置 10 min，期间颠倒混匀几次，溶液应该变清亮，但颜色偏黑。（如果未变清亮，请延长时间）
{C}6. 冷却后加 100 μl 无水乙醇 (或异丙醇)，充分振荡混匀，此时可能会出现絮状沉淀，短暂离心以去除管盖内壁水珠。
{C}7. 将所得溶液和絮状沉淀加入一个DNA 吸附柱中，（吸附柱放入收集管中）
13, 000 rpm 离心 1 min，DNA 被吸附在膜上，倒弃滤液。
{C}8. 加入 500 μl 抑制物去除液 IR，13, 000 rpm 离心 30 sec，倒弃滤液。
{C}9. 加入 600 μl 漂洗液 WB（请检查是否已加入无水乙醇），13, 000 rpm
离心 30 sec，倒弃滤液。
{C}10. {C}重复步骤 9 一遍。
{C}11. 将 DNA 吸附柱放回空收集管中，13, 000 rpm 离心 2 min，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。
{C}12. {C}取出 DNA 吸附柱，放入一个干净的 1.5 ml 离心管中，向吸附膜的中央加入 100 μl 洗脱缓冲液 EB （洗脱缓冲液事先在 80 ~ 100℃水浴中预热可以提高产量）， 室温放置 3 ~ 5 min，13, 000 rpm 离心 1 min。
▲可将第一次洗脱所得的 DNA 溶液重新加入离心柱中，室温放置 2 min， 13, 000 rpm 离心 1 min。可以提高浓度 10%左右。
{C}13. {C}DNA 可以存放在 2~8℃，如果要长时间存放，可以放置在-20℃。
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