凝固血液基因组DNA提取试剂盒（溶液型）
目录号:40311
产品内容：
|
产品成份 |
40311-320 （320 次x 50μl） |
|
细胞核裂解液 |
180 ml |
|
蛋白沉淀液 |
70 ml |
|
Glycogen |
0.7 ml |
|
蛋白酶 K 溶液 |
1 ml |
|
DNA 溶解液 |
30 ml |
自备试剂：
异丙醇、70％乙醇
保存条件：
室温（15~25℃）
产品简介：
适用于从凝固血液样本中快速提取高质量的基因组DNA。
首先细胞核裂解液配合蛋白酶K裂解凝固血块释放出基因组DNA， 然后蛋白沉淀液选择性沉淀去除蛋白，最后纯净的基因组DNA在Sigma的分子生物学级Glycogen的助沉下通过异丙醇沉淀并重溶解于DNA溶解液。
产品特点：
1. 简便快速：30 min 内可获得高纯度的基因组 DNA。
2. 安全无毒：无需苯酚/氯仿抽提。
3. 高产：典型的产量 1 ml 全血可提取出 10～30µg 基因组 DNA。
4. 高纯：OD260/280=1.7～1.9，长度可达 50～150 kb，可直接进行可直接用于构建文库、PCR、、酶切、Southern-blot 等分子生物学实验。
注意事项：
1. 本试剂盒可运用于多种抗凝剂的全血，如 EDTA、柠檬酸、肝素抗凝血。其中由于肝素抗凝血的白细胞沉淀团很难打散重悬，影响裂解效果，建议选用非肝素的抗凝剂收集血液标本。
2. 为了最佳效果，最好使用新鲜血液标本或者4℃存放少于3天的标本，不要使用反复冻融超过3次的标本，否则会严重降低产量。
3. 不同样品尤其疾病样品中白细胞数量差异可能非常大，血液DNA产量的个体差异也可能非常大。
4. 如果结合液CB、抑制物去除液IR有沉淀析出，可在37℃水浴溶解，摇匀后使用。
5. 本试剂盒为溶液型，可以很容易的按照比例扩大或者缩小每次处理的全血量（20µl-10ml），请联系我们索取其它处理量的操作手册。
6. DNA溶解液是TE缓冲液洗脱（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），长期保存DNA，但是EDTA可能下游酶切反应，使用时可以适当稀释。也可以使用水洗脱，但应该确保批pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱DNA应该保存在－20℃。
操作步骤：
1. 加入■50μl 凝固血液至一个 1.5ml 离心管或◆1ml 凝固血液至一个
50ml 离心管，剧烈涡旋或者用手剧烈拍打离心管帮助打散凝血块。
2. 加入■550μl 或◆11ml 细胞核裂解液，吹打混匀，再加入■3μl 或◆
60μl 蛋白酶 K(20mg/ml)，颠倒混匀 25 次。
3. 55℃放置 3 小时至过夜，直到所有的凝块完全融解。
4. 可选步骤（一般不需要做）：加入■3μl 或◆60μl RNase A（4mg/ml），在裂解物中加入 RNase A（10mg/ml）至终浓度 30μg/ml，颠倒 25 次混匀，37℃温育 15 分钟去除残留RNA。
5. 将裂解物迅速冷却到室温（可置冰上一分钟）。
6. 加入■200μl 或◆4ml 蛋白沉淀液，在涡旋振荡器上高速连续振荡混匀
25 秒，混匀后可能见到一些小的蛋白团块。
注意：液体确实要旋转着振荡起来，而不仅仅是上下振动，这样混匀效果和沉淀蛋白效果最佳。
7. 置冰上■5 分钟 或◆10 分钟。
8. ■13,000-16,000 x g 离心 5 分钟或◆2,500 x g(可根据需要调整加大离心力)离心 10 分钟。这时候应该可以见到管底暗褐色的蛋白沉淀，也可能见到一些蛋白沉淀漂浮在液体表面。
9. 小心吸取上清到一个新的■1.5ml 离心管 或◆50ml 离心管中。
注意：吸取上清时，注意不要吸到管底的和漂浮在液体表面的蛋白沉淀。如果不小心将蛋白沉淀转入新的离心管中，可再次离心 2 分钟后取上清。
10.加入■600μl 的室温异丙醇和 1μl Glycogen 溶液或◆12ml 室温异丙醇和 20μl Glycogen 溶液，轻柔颠倒 50 次混匀或者直到出现棉絮状（丝状）白色 DNA 沉淀。（注意：处理样品量大的时候才可能看见丝状沉淀，
处理样品量少或者保存质量不好的时候往往看不见。）
11. ■13,000-16,000 x g 离心 1 分钟或◆2,500 x g 离心 3 分钟，这时候应该看到管底白色的 DNA 沉淀。
12. 小心弃上清，倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇（注意不要丢失沉淀）。
13.加入■600μl 或◆12ml 70%乙醇，颠倒几次漂洗DNA 沉淀。
14. ■13,000-16,000 x g 离心 1 分钟或◆2,500 x g 离心 1 分钟, 倒去上清
（沉淀很松，注意不要把DNA 沉淀倒掉了），倒置后在吸水纸上轻敲几下以控干残留乙醇，还可以用枪头小心吸掉管底沉淀周围和管壁的残留乙醇，空气晾干沉淀几分钟。
注意：不要干燥过头，否则 DNA 极其难溶；也不能残留太多乙醇，否则乙醇可能抑制下游如酶切反应。
15.加入■20μl 或◆250-400μl TE 缓冲液(或者客户根据需要选择的缓冲液)重新水化溶解DNA 沉淀，轻弹管壁混匀，可以放置在 65℃温育 30-60分钟（不要超过一小时），也可以在室温或者 4℃放置过夜来重新水化 DNA，中间不时的轻弹管壁帮助重新水化 DNA。
16. DNA 可以存放在 2-8℃,如果要长时间存放，可以放置在－20℃。
相关产品：
50111-500 10000x GenRed（同GelRed） 无毒核酸染料 凝胶成像仪用
71800-05 2x Lightning Taq PCR MasterMix（含染料） 延伸速度：6 kb/min
71517-05 2x KOD PCR MasterMix（含染料） 扩增长度≤6kb 6 kb/min