咽拭子基因组DNA快速提取试剂盒（离心柱型）

目录号：40310

v  适用范围：

适合于从口腔/咽拭子中分离纯化基因组DNA。

v 试剂盒组成、储存、稳定性：

本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果

储存事项：

1.   结合液CB或者抑制物去除液IR低温时可能出现析出和沉淀，可以在37℃水浴几分钟帮助重新溶解，恢复澄清透明后冷却到室温即可使用。

2.   为避免降低活性，方便运输，提供蛋白酶K为冻干粉状，收到后，可短暂离心后，加入1毫升灭菌水溶解。因为反复冻融可能会降低酶活性，因此溶解后立即按照每次使用量分装冻存，－20℃保存。

3.   避免试剂长时间暴露于空气中发生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧盖子。

v  产品介绍：

本试剂盒采用特制的进口DNA吸附柱和独特的缓冲液系统，特别适合于从口腔/咽拭子中分离纯化基因组DNA。各种来源样品裂解消化处理后DNA在高离序盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜（特别配备了Acryl Carrier可以从体系中轻松捕获微量核酸），再通过一系列快速的漂洗－离心的步骤，将盐、细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的洗脱缓冲液将纯净的基因组DNA从硅基质膜上洗脱。纯化后的DNA无杂质和PCR抑制剂，可直接适用于PCR分析。

v产品特点：

1.          不需要使用有毒的苯酚等试剂，也不需要乙醇沉淀等步骤。

2.          节省时间，简捷，单个样品操作一般可在20分钟内完成。

3.          配备了Acryl Carrier 用于充分收集特别微量DNA。

4.          多次柱漂洗确保高纯度，提取的DNA 纯度高，质量稳定可靠，可适用于各种常规操作，包括PCR、酶切、测序、Southern 杂交等。

v 注意事项：

1.          所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。

2.          开始实验前将需要的水浴先预热到特定温度备用。

3.          结合液CB 和抑制物去除液IR中含有刺激性化合物，操作时戴乳胶手套，避免沾染皮肤、眼睛和衣服。若沾染皮肤、眼睛时，要用大量清水或者生理盐水冲洗。

4.          Acryl Carrier：

1)              Acryl Carrier 使用方法：如果起始处理量很少（口腔咽拭子上收集到的细胞很少），我们推荐使用Acryl Carrier，如果预期有较大量DNA产量，用户可以根据需要选择是否加入Acryl Carrier。使用时在每个样品提取所需400μl结合液CB 中加入4μl Acryl Carrier，将结合液CB 与Acryl Carrier溶液充分颠倒混匀即可(结合液CB容易起泡沫,请勿使用涡旋振荡混匀)。也可根据样品数量，在总共需要的结合液CB中加入总共需要的Acryl Carrier混匀备用。混合液在室温24小时内稳定。

v  操作步骤：（实验前请先阅读注意事项）

提示：第一次使用前请先在15ml漂洗液WB中加入60ml无水乙醇，充分混匀，加入后请及时在方框打钩标记已加入乙醇，以免多次加入!

取样：取一根医用消毒棉签（手不要碰触脱脂棉部位），伸进口腔，紧靠脸颊内侧来回刮拭20次（不时旋转棉棒），需充分接触口腔粘膜。

注意事项：避免用手触及棉签，采集前可先用清水轻轻漱口。为防止样本被食物或者饮料污染，取样前30分钟内应该避免进食或者饮水。

1.          用剪刀将棉签部分从其杆上剪下，放入2ml 离心管中，加入400μl裂解液ML。

2.          再加入20μl的蛋白酶K (20mg/ml)溶液，立刻涡旋振荡充分混匀，56℃放置1小时，期间每10分钟涡旋混匀10秒。

3.          加入400μl结合液CB，立刻涡旋振荡充分混匀，70℃放置10分钟。

如果拭子上细胞数量少，导致提取的基因组DNA产量过低, 可以在400μl结合液CB 中加入4μl Acryl Carrier 。

4.          冷却后加200μl 无水乙醇，立刻涡旋振荡充分混匀。简短离心以除去管盖内壁的液滴，收集所有的液体到管底。

如果周围环境高于25℃,乙醇需要冰上预冷后再加入。

5.          将上一步混合物加入一个吸附柱AC中，（吸附柱放入收集管中）13,000rpm离心30-60秒，倒掉收集管中的废液。

棉签的棉花可能还吸附一些液体，如果要提高产量，可以用干净镊子夹挤出液体后弃棉花，减少棉花上液体残留。

6.          加入500μl抑制物去除液IR，12,000rpm 离心30秒，弃废液。

7.          加入500μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

8.          加入500μl漂洗液WB，12,000rpm 离心30秒，弃掉废液。

9.          将吸附柱AC放回空收集管中，13,000rpm离心2分钟，尽量除去漂洗液， 以免漂洗液中残留乙醇抑制下游反应。

10.      取出吸附柱AC，放入一个干净的离心管中，在吸附膜的中间部位加20－50μl洗脱缓冲液EB （洗脱缓冲液事先在65-70℃水浴中预热效果更好）， 室温放置1分钟，12,000rpm 离心1分钟。将得到的溶液重新加入离心吸附柱中，室温放置1分钟，12,000rpm离心1分钟。

洗脱体积越大，洗脱效率越高，如果需要DNA浓度较高，可以适当减少洗脱体积， 但是最小体积不应少于20μl，体积过小降低DNA洗脱效率，减少DNA产量。

11.    DNA可以存放在2-8℃，如果要长时间存放，可以放置在－20℃。

v  问题与解决方法：